GIPZ Lentiviral shRNAライブラリー
ハイスループットshRNAスクリーニングのための全ゲノムコレクション
GIPZレンチウイルスshRNAコレクションは、Cold Spring Harbor Labsによって設計および構築されました。各shRNAヘアピンはpGIPZレンチウイルスベクターにクローニングされ、各クローンは96ウェルプレートにアレイ化されています。
ハイスループットshRNAスクリーニングのための全ゲノムコレクション
GIPZ lentiviral shRNAは、個々のヒトまたはマウスコンストラクト、ターゲット遺伝子セット、トランスフェクションまたはトランスダクションスターターキット、アレイライブラリーとして提供されます。ポジティブおよびネガティブGIPZ shRNAコントロールは、グリセロールストックおよびウイルス粒子フォーマットで入手できます。
GIPZレンチウイルスshRNAの利点:
pGIPZおよびpTRIPZベクターは、InvitrogenのViraPower™などの第3世代パッケージングシステムと適合性がないことに注意してください。当社のベクターで使用するには、Trans-Lentiviral™ Packaging Systemをお勧めします。
* 同一遺伝子をターゲットとする3種類以上のGIPZ Lentiviral shRNAクローンを用いて実験を行った場合、そのうち1つについて、mRNAレベルで70%以上の遺伝子発現抑制を保証します。ターゲットGIPZ lentiviral shRNAクローンとともにnon-silencing コントロールおよびGIPZ GAPDHポジティブコントロールを用いて同一条件下で同時に実験を行い、ポジティブコントロールが十分に機能しているコントロール実験のデータが必須となります。
GIPZレンチウイルスshRNAライブラリーは、8%グリセロール、カルベニシリン(100 μg/mL)、およびゼオシン(25 μg /mL)を含むLB(低塩)ブロス中の大腸菌の凍結ストック培養を含む96ウェルマイクロタイタープレートで提供されます。出荷前にすべての培養物の成長をチェックします。shRNAクローンは-80℃で保存する必要があります。
pGIPZレンチウイルスベクター
Figure 1.
GIPZレンチウイルスshRNAを使用した効果的なノックダウン
Figure 2. OVCAR-8細胞にGIPZレンチウイルスshRNAコンストラクトをMOI = 0.4~2で2~4回の生物学的レプリケートで形質導入しました。細胞は、形質導入の48時間後にピューロマイシン選択(30 μg/mL)を開始しました。形質導入後84時間でRNAを調製しました。
内部参照として18S rRNAを使用して、TaqMan® Gene Expression AssaysによりqPCRを3回実行しました。平均して、3つのshRNAのうち2つが、GIPZ Non-targetingコントロールshRNAと比較して70%を超えるノックダウンをもたらしました。
形質導入細胞におけるTurboGFP発現
Figure 3.
合理的に設計されたshRNAの利点と選択可能なプロモーターと蛍光レポーターを組み合わせて、分裂細胞または非分裂細胞で数百~数千のshRNAの機能スクリーニングを実行します。
合理的に設計されたshRNAの利点と選択可能なプロモーターおよびレポーターの柔軟性、さらにTet-On 3Gテトラサイクリン誘導発現システムを組み合わせ、厳格な発現調節によるshRNAの機能スクリーニングを実行します。