CRISPRガイドRNAはCas9ヌクレアーゼをプログラムし、特定の場所でゲノムDNAを切断します。二本鎖切断(DSB)が生じると、哺乳類細胞は内因性メカニズムを利用してDSBを修復します。ssDNAオリゴまたはプラスミドドナーのいずれかのドナーDNAの存在下で、DSBはHDRを使用して正確に修復でき、目的のゲノム変化(挿入、欠失、または置換)をもたらします。

HDRドナーテンプレートの設計を開始する

  • CRISPR Design Tool

    カスタムガイドRNAを注文するか、使いやすいインターフェースを使用して独自の化学合成sgRNA、crRNA、またはlentiviral sgRNAを設計および注文します。

  • HDR Donor Designer

    30以上の異なる種で、HDRを介した遺伝子編集用のカスタムドナーオリゴまたはプラスミドを設計および注文できます。

相同組換え修復(HDR)は、切断部位に隣接する領域と十分な相同性を持つドナーテンプレートの存在に依存しています。相同性アームの長さとドナーのタイプ(ssDNAオリゴまたはプラスミド)は、行われる正確な修飾のタイプとサイズに依存します。Figure 1は、タグや制限酵素部位などの短いDNA領域を挿入するためのドナーオリゴの使用を示しています。Edit-R HDR Donor Designerを使用すると、ドナーオリゴのカスタマイズを簡便に行うことができます。

短いDNA配列を正確に挿入するためのドナーオリゴ
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Figure 1. 蛍光マーカーなどのより大きな挿入の場合、効率的な組換えをサポートするために適切に長い相同性アームを備えたドナープラスミドテンプレートが必要です。Edit-R HDR DNA Plasmid donor kitEdit-R HDR Donor Designerを併用すると、ドナープラスミドの設計と組み立てのプロセスが迅速かつ簡単になります。

蛍光選択マーカーを挿入するためのドナープラスミドアセンブリ
donor plasmid assembly fluorescence 

Figure 2. 蛍光マーカーを挿入するためのドナープラスミドアセンブリ