当社のプレミアムなshRNA製品は、microRNAベースshRNAデザインを採用しており、細胞内でより効率的にプロセッシングされ、RNAi実験における毒性が低減する可能性があることが示唆されています。詳細については、shRNAアプリケーションのページをご覧ください。
しかしながら、効率的な遺伝子ノックダウンは、shRNAデザインと発現レベルの両方に依存します。したがって、特定の細胞株で十分なshRNA発現を促進するためには、プロモーターの選択も重要です。
SMARTvector™ – 実験に合わせた柔軟な製品選択が可能なshRNA
SMARTvectorバックボーンでは、7つのプロモーターと3つのレポーターオプションから選択し、特定の細胞や実験要件に合わせてshRNAを最適化できます。
最適化されたプロモーターの下で発現されるSMARTvectorレンチウイルスshRNAは、最先端のmicroRNAベースのshRNA固有の合理的デザインアルゴリズムを使用してデザインされており、非常に強力で特異的なノックダウンを実現します。SMARTchoice promoter selection plateを使用して、細胞株に最適なプロモーターを特定することができます。
SMARTvector shRNAは、Tet-on®3G誘導性プロモーターとともに利用可能で、可逆的で制御された遺伝子ノックダウンを実現します。これは、必須遺伝子の機能を研究する場合に特に役立ちます。
GIPZ/TRIPZコレクション
GIPZ shRNAおよびTRIPZ誘導性shRNAは、細胞毒性を最小限に抑えた特異的な遺伝子ノックダウンを提供しますが、SMARTvectorで実現できるようなプロモーター／レポーターの選択柔軟性は不足しています。GIPZコレクションとTRIPZコレクションはどちらも、Gregory Hannon（Cold Spring Harbor Laboratories）とSteve Elledge（Harvard）により共同開発されたものです。
Order shRNA reagents
SMARTvector lentiviral shRNA
複数のプロモーターおよびレポーターオプションによる遺伝子のノックダウンが保証されています。
SMARTvector inducible lentiviral shRNA
類のないノックダウン制御のためのTet誘導技術を備えたSmartvectorレンチウイルスshRNA
GIPZ lentiviral shRNA
microRNAベースのshRNAデザインによる効率的な遺伝子ノックダウン
TRIPZ inducible lentiviral shRNA
厳密に制御可能なRNAi実験のための誘導性shRNAを発現します。
TRC lentiviral shRNA
ヒトおよびマウス細胞用のThe RNAi Consortium（TRC）からのレンチウイルスshRNAコレクション
製品選択ガイド
表をご参照の上、実験目的に適したshRNA試薬をご選択ください。
| SMARTvector shRNA | GIPZ | TRIPZ | TRC | |
|---|---|---|---|---|
| 生物種 | Human, Mouse, Rat | Human, Mouse | Human | Human, Mouse |
| プロモーター |
恒常発現：7種類より* 誘導発現：4種類より |
Human CMV Pol II | TRE-min-CMV | U6 Pol III |
| Vector backbone | Lentiviral | Lentiviral | Lentiviral | Lentiviral |
| ステムループ形式 | microRNAベース | MimicroRNAベース | microRNAベース | シンプルヘアピン型 |
| 蛍光レポーター遺伝子 | GFP/RFP | GFP | RFP | |
| ノックダウン保証** | ||||
| In vivo RNAi | ||||
| 安定した細胞株の作成 | ||||
| 初代細胞や非分裂細胞に推奨 | ||||
| 誘導発現用 | ||||
| 全ゲノムライブラリー | Human, Mouse, Rat | Human, Mouse | Human | Human, Mouse |
| 製品形態 |
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*一部のプロモーターオプションは、カスタム製品として、またはリクエストに応じてのみ利用できる場合があります。
**SMARTvector、GIPZ、およびTRIPZレンチウイルスshRNAの場合、3つのコンストラクトのうち少なくとも1つは、適切なnon-targetingおよびポジティブコントロールと組み合わせて使用した場合、ターゲットmRNAレベルが70％以上減少することが保証されます。保証の詳細は各製品ページをご覧ください。
microRNAベースshRNAであるSMARTvectorと単純なヘアピン型shRNAとの比較
がん細胞株におけるSMARTvector Inducible Lentiviral shRNA発現の誘導は堅牢であり、ドキシサイクリンの用量依存的に厳密に制御可能
SMARTvector shRNA reagents & controls
shRNAコントロールは、遺伝子ノックダウン実験にとって重要であり、信頼性と再現性のある結果を得るための正確な解釈を可能にします。
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SMARTvector lentiviral shRNA
複数のプロモーターおよびレポーターオプションによる遺伝子のノックダウンが保証されています。
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SMARTvector lentiviralコントロール
7つのプロモーターと3つのレポーターオプションを選択できる、ポジティブおよびネガティブ恒常発現型shRNAコントロール
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SMARTvector inducible lentiviral shRNA
類のないノックダウン制御のためのTet誘導技術を備えたSmartvectorレンチウイルスshRNA
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SMARTvector inducible lentiviralコントロール
4つのプロモーターと2つのレポーターを選択できる、ポジティブコントロールとネガティブ誘導発現型shRNAコントロール
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SMARTchoice promoter selection plate
細胞株に最適なSMARTvectorプロモーターオプションを特定します。
shRNA collections & controls
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GIPZ lentiviral shRNA
microRNAベースのshRNAデザインによる効率的な遺伝子ノックダウン
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GIPZ lentiviralコントロール
適切に設計されたRNAi実験のための検証済みのGIPZポジティブおよびネガティブコントロールコレクション
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TRIPZ inducible lentiviral shRNA
厳密に制御可能なRNAi実験のための誘導性shRNAを発現します。
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TRIPZ inducible lentiviralコントロール
実験ウィンドウを設定するためのポジティブおよびネガティブTRIPZ誘導型レンチウイルスshRNAコントロール
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TRC lentiviral shRNA
ヒトおよびマウス細胞用のThe RNAi Consortium（TRC）からのレンチウイルスshRNAコレクション
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TRC lentiviralコントロール
GFPを標的とするポジティブshRNAコントロールおよび空のレンチウイルスベクターネガティブコントロール
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プール化shRNAスクリーニング用ライブラリー
プール化レンチウイルスライブラリーでスクリーニングを実行し、細胞応答およびシグナル伝達経路を調節する遺伝子の特定、または新しい遺伝子機能の発見に使用できます。プール化スクリーニングライブラリーは、最少50から最大数千のコンストラクトで構成できます。アレイ化試薬を使用したスクリーニングのための費用のかかる自動化技術とは対照的に、プール化スクリーニングライブラリーは、少ない数の培養細胞集団に対して形質導入およびスクリーニングすることができます。
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カスタムプール化レンチウイルススクリーニングライブラリー
RNAiノックダウンスクリーニング用の柔軟にカスタマイズ可能なレンチウイルスshRNAのコレクション
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SMARTvector lentiviral shRNAプール化ライブラリー
ヒト、マウス、およびラットの遺伝子に対するSMARTvector Lentiviral shRNAを予め組み合わせた高力価プール化スクリーニングライブラリー。7つのプロモーターと3つのレポーターオプションから選択し、実験に最適なフォーマットを選択できます。
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SMARTvector inducible lentiviral shRNAプール化ライブラリー
ヒト、マウス、およびラットの遺伝子に対するSMARTvector Inducible Lentiviral shRNAを予め組み合わせた高力価プール化スクリーニングライブラリー。4つのプロモーターと2つのレポーターオプションから選択し、実験に最適なフォーマットを選択できます。
アレイ化shRNAスクリーニングライブラリー
96ウェルフォーマットのグリセロールストックとして提供されます。これらのライブラリーは、遺伝子活性を解明し、特定の経路または遺伝子ファミリーを研究するためのアレイ化スクリーニングフォーマットに最適です。
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カスタムcherry-pick cloneライブラリー
遺伝子リストをアップロードして、独自のカスタム配列shRNAライブラリーを構築します。
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GIPZレンチウイルスshRNAライブラリー
ハイスループットshRNAスクリーニングのためのゲノムワイドコレクション
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TRIPZ誘導性レンチウイルスshRNAライブラリー
96ウェルプレートにアレイ化されたゲノムスケールのTRIPZ誘導性レンチウイルスshRNAライブラリー
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TRCレンチウイルスshRNAライブラリー
The RNAi Consortium（TRC）によって設計されたpLKO.1レンチウイルスベクターの単シンプルヘアピン型shRNA
SMARTvectorレンチウイルスshRNA機能保証
同一遺伝子（タンパク質をコードする遺伝子に限る）をターゲットとする3種類以上のshRNAクローンを用いて実験を行った場合、そのうち1つについて、mRNAレベルで70%以上の遺伝子発現抑制を保証します。この機能保証では、使用する細胞に最適なプロモーターを搭載したターゲットshRNAクローンとともにnon-targeting コントロールおよびGAPD/PPIBポジティブコントロール（いずれもターゲットshRNAクローンと同一のプロモーターおよび蛍光マーカーを搭載しているもの）を用いて同一条件下で同時に実験を行い、ポジティブコントロールが十分に機能しているコントロール実験のデータが必須となります。使用する細胞に最適なプロモーターは SMARTchoice promoter selection plateを用いて決定してください。ノックダウン効率は、ウイルス粒子の感染から72時間以内に、non-targeting コントロールを導入した細胞に対して定量RT-PCR法を用いて評価してください。
なお、この機能保証は、製品コードがV3S*xxxxである製品のみに適用され、また、long noncoding RNAをターゲットとする製品には適用されません。
GIPZ/TRIPZ機能保証
キット取扱説明書にしたがってStarter kitを使用した場合に適用されます。同一遺伝子をターゲットとする3種類のshRNAクローンを用いて実験を行った場合、そのうち1つについて、mRNAレベルで70%以上の遺伝子発現抑制を保証します。この機能保証では、ターゲットshRNAクローンとともにキットに添付のポジティブコントロールを用いて同一条件下で同時に実験を行い、ポジティブコントロールが十分に機能しているコントロール実験のデータが必須となります。ノックダウン効率は、Non-silencingネガティブコントロールを導入した細胞に対して定量RT-PCR法を用いて評価してください。また、全てのトランスフェクション実験は、キットに添付のトランスフェクション試薬を用いてください。
GIPZ Lentiviral shRNAおよびTRIPZ Inducible Lentiviral shRNAは、InvitrogenのViraPowerなどの第3世代パッケージングシステムと互換性がないことに注意してください。GIPZおよびTRIPZ shRNAの形質導入用のレンチウイルス粒子の作製にはTrans-Lentiviral Packaging Systemをお勧めします。