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CRISPRmod CRISPRi lentiviral sgRNAポジティブコントロール
遺伝子転写抑制実験の最適化のための検証済みCRISPRi lentiviral sgRNA

CRISPRi lentiviral sgRNAポジティブコントロールは、十分に特徴付けられたヒト遺伝子(PPIB1またはSEL1L)を選択的に転写抑制します。ポジティブコントロールは、標的遺伝子特異的ガイドRNAを用いた実験の前に、デリバリー条件とdCas9-SALL1-SDS3発現の、最適化と継続的なモニタリングに推奨されます。
Highlights
- ポジティブコントロール遺伝子としてPPIB1またはSEL1Lをご用意しています。
- グリセロールストックおよび高力価精製レンチウイルス粒子(1 x 108 TU/mL以上, 50µL)として入手可能
- 実験条件の最適化、および遺伝子転写抑制が確実に実施されたことを確認するために使用します。
ポジティブコントロールに加えて、CRISPRi lentiviral sgRNA non-targetingコントロールを使用して、遺伝子発現のベースラインレベルを決定することをお勧めします。
CRISPRiレンチウイルスsgRNAは長期転写抑制に最適である
CRISPRiレンチウイルスsgRNAは長時間転写抑制に最適である
dCas9-KRABまたはdCas9-SALL1-SDS3を安定して発現するU2OSおよびA549細胞を、24ウェルプレートに50,000細胞/ウェルでプレーティングし、PPIBあるいはSEL1LをターゲットとするsgRNAレンチウイルス粒子をMOI 0.3で形質導入して、単一のインテグラントを含む細胞を得ました。細胞を2µg/mLピューロマイシンで5日間選択培養し、2つの集団に分割し、さらに1日回復培養しました。形質導入の7日後に、RT-qPCR分析のために1つの細胞集団を回収しました。もう1つの複製集団は、回収前にさらに7日間培養しました。回収したプレートから全RNAを単離し、ハウスキーピング遺伝子としてGAPDHを用いたΔΔCq法で相対的な遺伝子発現を計算し、non-targetingコントロールに対して正規化しました。
Brochures
Certificate of analysis
Product inserts
Safety data sheets
Technical manuals
Related Products
Validated CRISPRi lentiviral sgRNA for evaluation of transcriptional repression experiments.