SMARTchoice promoter selection plate

遺伝子発現調節試薬
RNA干渉
shrna
SMARTchoice Promoter Selection Plate

SMARTchoice promoter selection plate

目的の細胞における発現を積極的に駆動するプロモーターを簡単に定性的に評価できる画期的なツール

SMARTchoice Promoter Selection Plateを使用して目的の細胞に最適なプロモーターを特定することで、レンチウイルスshRNAおよびshMIMIC microRNAの機能と性能を向上させることができます。その結果、形質転換された初代胚性幹細胞や神経細胞など、目的の細胞で遺伝子のダウンレギュレーションが成功します。

SMARTchoice Promoter Selection Plateを使用する接着細胞内の活性プロモーターの同定

単一のマトリックス実験で、SMARTchoice Promoter Selection Plateを使用すると、目的の細胞の感染多重度（MOI）の範囲で7つの異なる構成的プロモーターを評価できます。

細胞への形質導入後、蛍光顕微鏡、ハイコンテントイメージング、またはマイクロプレートリーダーを使用して、各ウェルのTurboGFP強度を迅速かつ視覚的に評価できます。最も活性の高い（最高のTurboGFP発現を伴う）プロモーターは、細胞内でSMARTvector shRNAまたはshMIMICの最も高い発現を提供します。この結果より、プロモーターとレポーターを選択してSMARTvector lentiviral shRNAまたはshMIMIC microRNAを注文することができます。

誘導性プロモーターの選択については、SMARTchoice inducibleコントロールのページをご覧ください。

製品詳細

TurboGFP（Evrogen, Moscow, Russia）の発現を駆動する7つのよく特徴付けられた恒常的細胞プロモーターを備えたSMARTvector Non-targetingコントロール（NTC）のアレイプレートです。

高力価レンチウイルス粒子は、一貫した活性のためにパッケージ化、精製、および濃縮されています。

レンチウイルス粒子は、複数のMOIをテストできるように、便利な96ウェルフォーマット（サポートデータタブを参照）で段階希釈して配列されています。

Highlights

発現を積極的に駆動するプロモーターの簡単な定性的評価を可能にします（Figure 2）。
蛍光顕微鏡、ハイコンテンツイメージャー、またはマイクロプレートリーダーを使用してTurboGFP強度を迅速に評価します。
shRNAまたはmicroRNAの発現を改善することができます（Figure 3）：
- shRNAベースのサイレンシングのパフォーマンスを向上することができます。
- shMIMIC microRNA遺伝子標的のダウンレギュレーション効力を増加することができます。

SMARTchoiceプロモーターおよびレポーターオプションは、shRNAまたはmicroRNAの発現に利用できます。SMARTvector Lentiviral shRNA、またはshMIMIC Lentiviral microRNAのページもご覧ください。

SMARTchoice Promoter Selection Plateのレイアウト

Figure 1. 96ウェルSMARTchoice Promoter Selection Plateのレイアウト

SMARTchoice Promoter Selection Plateにより、最も発現を駆動するプロモーターの簡単な定性的評価が可能

Figure 2. SMARTchoice Promoter Selection Plateにより、最も発現を駆動するプロモーターの簡単な定性的評価が可能になります。

ヒトA549、HEK293T、およびJurkat細胞に、SMARTchoice Promoter Selection Plateに配列された濃縮レンチウイルス粒子を形質導入しました。 TurboGFPの発現は、形質導入の72時間後に蛍光顕微鏡で評価しました。画像は、A549細胞で最も機能的なプロモーターがmCMVであるのに対し、HEK293TではhCMVプロモーターは最も活性があり、Jurkat細胞ではmEF1αプロモーターは最も活性があることを明確に示しています。
TU = transducing unit

shRNAとshMIMICの発現を最大化するための最適なプロモーターを選択可能

Figure 3. レンチウイルスのmicroRNA発現に影響を及ぼすプロモーターは細胞ごとに活性が異なり、その結果、標的遺伝子発現のダウンレギュレーションに影響を及ぼします。マウスNIH/3T3細胞に、ALDOAを調節するmmu-miR-122を発現するshMIMICレンチウイルスmicroRNA粒子と、non-targetingコントロール（siNTC）を形質導入しました。形質導入培地には、血清を含まない3μg/mLのポリブレンが含まれていました。細胞をMOI ＝ 30、15、7.5でレンチウイルス粒子とともに一晩インキュベートし、形質導入の72時間後、プロモーター活性を示すTurboGFP蛍光強度を顕微鏡で観察しました。マウスNIH/3T3細胞では、マウスCMV(mCMV)プロモーターが最も活性があります。さらに、ALDOAおよびGAPDH（Reference gene）の発現をRT-qPCRで測定しました。ALDOAの相対的発現は、ΔΔCq法を使用してGAPDHに対して正規化され、次にsiNTC処理細胞に対して正規化されました。mCMVプロモーターによるmiR-122の発現は、ALDOAの最大のダウンレギュレーションをもたらしました。