Edit-R human all-in-one lentiviral sgRNA 全ゲノムプール化ライブラリー

信頼性の高い遺伝子ノックアウトに必要なすべてのコンポーネントを単一の試薬に統合することにより、コストのかかるインフラを必要とせずに、偏りのない表現型ノックアウトスクリーニングを実施できます。

Edit-R All-in-one sgRNA プール化レンチウイルスライブラリーを1回形質導入するだけで、数千の遺伝子をDNAレベルで簡単にノックアウト可能

このライブラリーフォーマットは、トランスフェクションが困難な細胞や初代細胞でノックアウトを行うのに有効であり、効率的なゲノムスクリーニングを可能にし、遺伝子研究や治療法の発見を推進します。

プロモーター（mCMVとhEF1α）の選択により、目的の細胞での最適なCas9ヌクレアーゼ発現が可能になります。

CRISPRガイドRNAが標的DNAに二本鎖切断を生じさせ、機能的タンパク質の破壊を引き起こす能力は、ガイドRNA（gRNA）の配列と標的遺伝子内の位置によって異なります。この問題に対処するため、Dharmacon Edit-Rアルゴリズムは、ヒトゲノム全体にわたって非常に特異的で機能的なRNAガイドを提供します。

Edit-R all-in-one lentiviral sgRNAのベクターマップ
Schematic map of the Edit-R All-in-one lentiviral sgRNA vector

Edit-R CRISPR RNAアルゴリズムは、ガイドRNA配列を生成します：

  • 複数のミスマッチやギャップのあるアラインメントの検出を含む、迅速かつ徹底的な特異性分析を備えた最適化されたアラインメントプログラム
  • 単なるindelの生成ではなく、遺伝子の機能的破壊に関連する特性を特定するための体系的な評価研究（1100を超えるガイドRNAを使用）により、標的遺伝子の機能的ノックアウトが増加

Edit-R CRISPR RNA アルゴリズムを用いて、プール化レンチウイルススクリーニングに必要なシングルコピーの組込みレベルで高効率な遺伝子ノックアウトを示すレンチウイルス sgRNA を設計しました。

Highlights:

  • Cas9と遺伝子特異的sgRNA発現の両方に単一のレンチウイルスベクターを使用する効率的なall-in-oneベクターシステム
  • 機能的に検証された独自のアルゴリズムを用いて合理的に設計されたEdit-RレンチウイルスsgRNAが、比類のない特異性で効率的な遺伝子ノックアウトを実現
  • ヒトゲノム全体にわたり、1遺伝子あたり4または8個のsgRNAで深く広いカバレッジを実現し、ヒットの信頼性を向上
  • 生物学的に関連性のある細胞タイプで強固な編集を行うための複数のプロモーターオプション
  • 最小限の細胞毒性で直接導入するために濃縮、精製された高品質レンチウイルス粒子。力価2 x 107 TU/mL以上。
各Edit-R All-in-one lentiviral sgRNA プールドスクリーニングライブラリーには、次のものが含まれています：
  • ≥ 2×107TU/mL（±20%）レンチウイルス粒子、10×100µLアリコート、mCMVまたはhEF1αプロモーターオプション付き
  • ≥ 2×107TU/mL（±20%）レンチウイルス粒子、10×100µLアリコート、デリバリーコントロール付き
  • NCBI参照配列データベースのコーディング遺伝子をターゲットとする遺伝子あたり4または8個のsgRNA
  • ヒトゲノムのどの遺伝子ともアライメントしない（標的化しない）ことがバイオインフォマティックに確認された100個の非標的sgRNAネガティブコントロール
  • 遺伝子アノテーション、sgRNAターゲット配列、完全なコントロールリスト、数百万マップリードあたりのカウントを含む完全なライブラリー情報を含むデータファイル
当社の検証済みプロトコールで推奨されている製品：
  • トランスダクションの最適化とプロモーター選択のためのベクター対応Edit-R EGFPデリバリーコントロール
  • NGS Hit Identification mCMV or hEF1α primers:
    • バイアスを最小限に抑えたゲノムDNAの効率的なPCR増幅
    • NGSランに多様性をもたらすスタッガードフォワードプライマー
    • 部分的なIllumina® 互換TruSeq®アダプターの追加
Edit-R Lentiviral sgRNA プール化ライブラリーのカバレッジに関する情報

遺伝子数およびコンストラクト数は予告なく変更される場合があります。クローン数および遺伝子数はご要望に応じてご提供いたします。Contact Scientific Support までお問い合わせください。