CRISPRi synthetic sgRNA（化学合成sgRNA）non-targetingコントロールは、CRISPRi sgRNAを使用した遺伝子転写抑制実験のネガティブコントロールとして使用するために設計され、推奨されています。これらのnon-targetingコントロールは、dCas9-SALL1-SDS3と結合して複合体を形成しますが、ヒトゲノム内のPAM隣接部位を標的としません。ネガティブコントロールで処理された細胞で観察された遺伝子発現レベルまたは生存率の変化は、標的特異的CRISPRi化学合成sgRNAで処理された細胞と比較するためのCRISPRiコンポーネントに対する細胞のベースライン応答として使用できます。

Highlights

• ヒトゲノム内の潜在的なターゲット配列に対して少なくとも3つのミスマッチまたはギャップを検証するために使用される独自のアラインメントツールを採用
• 実験に使用するsgRNA試薬フォーマットに一致するプールフォーマットまたは個別sgRNAコントロールを選択できます。
• 遺伝子発現のベースラインレベルを確立するために使用します。

non-targetingコントロールに加えて、CRISPRi化学合成ポジティブコントロールを使用して、効率的な遺伝子転写抑制のための実験条件を最適化することをお勧めします。