CRISPRmod CRISPRi化学合成sgRNAポジティブコントロール
遺伝子転写抑制実験の最適化のための検証済みのCRISPRi用化学合成プールフォーマットまたは個別のsgRNA
最適な実験条件を評価し、効率的な遺伝子転写抑制のためにdCas9-SALL1-SDS3の発現を確認するために使用します。

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遺伝子転写抑制実験の最適化のための検証済みのCRISPRi用化学合成プールフォーマットまたは個別のsgRNA
CRISPRi化学合成sgRNAポジティブコントロールは、十分に特徴付けられたヒト遺伝子(PPIB1またはSEL1L)を選択的に転写抑制します。ポジティブコントロールは、標的遺伝子特異的なガイドRNAを用いた実験の前に、デリバリー条件とdCas9-SALL1-SDS3発現の、最適化と継続的なモニタリングに推奨されます。
ポジティブコントロールに加えて、CRISPRi化学合成sgRNA non-targetingコントロールを使用して、遺伝子発現のベースラインレベルを決定することをお勧めします。
dCas9-SALL1-SDS3mRNAと化学合成sgRNAポジティブコントロールの同時デリバリーによる強力な遺伝子転写抑制。dCas9-SALL1-SDS3 mRNAと化学合成sgRNAポジティブコントロールの同時導入による強力な遺伝子転写抑制。K562およびJurkat細胞に、Lonza 96ウェルシャトルシステムを用いて、dCas9-KRABまたはdCas9-SALL1-SDS3 mRNA(2 µg)、および、PPIBあるいはSEL1Lをターゲットとするプールフォーマット化学合成sgRNA(5 µM)を導入ました。WTC-11 hiPS細胞に、Lonza 96ウェルシャトルシステムを用いて、dCas9-KRABまたはdCas9-SALL1-SDS3 mRNA(1 µg)、および、PPPIBまたはSEL1Lをターゲットとするプールフォーマット化学合成sgRNA(3 µM)を導入しました。72時間後に細胞を回収しました。全RNAを単離し、RT-qPCRを使用して相対的な遺伝子発現を測定しました。各標的遺伝子の相対的な遺伝子発現は、ハウスキーピング遺伝子としてGAPDHを用いた∆∆Cq法で計算し、non-targetingコントロール(NTC)に対して正規化しました。
Validated CRISPRi synthetic pools or individual sgRNA for evaluation of transcriptional repression experiments.