- CRISPR interference reagents
- CRISPRi化学合成sgRNAポジティブコントロール
CRISPRmod CRISPRi化学合成sgRNAポジティブコントロール
遺伝子転写抑制実験の最適化のための検証済みのCRISPRi用化学合成プールフォーマットまたは個別のsgRNA

CRISPRi化学合成sgRNAポジティブコントロールは、十分に特徴付けられたヒト遺伝子(PPIB1またはSEL1L)を選択的に転写抑制します。ポジティブコントロールは、標的遺伝子特異的なガイドRNAを用いた実験の前に、デリバリー条件とdCas9-SALL1-SDS3発現の、最適化と継続的なモニタリングに推奨されます。
Highlights
- ポジティブコントロール遺伝子としてPPIB1またはSEL1Lをご用意しています。
- 実験に使用するsgRNA試薬フォーマットに一致するプールフォーマットまたは個別sgRNAコントロールを選択できます。
- 実験条件の最適化、および遺伝子転写抑制が確実に実施されたことを確認するために使用します。
ポジティブコントロールに加えて、CRISPRi化学合成sgRNA non-targetingコントロールを使用して、遺伝子発現のベースラインレベルを決定することをお勧めします。
CRISPRi化学合成sgRNAポジティブコントロールによる強力な遺伝子ノックダウン
dCas9-SALL1-SDS3mRNAと化学合成sgRNAポジティブコントロールの同時デリバリーによる強力な遺伝子転写抑制。dCas9-SALL1-SDS3 mRNAと化学合成sgRNAポジティブコントロールの同時導入による強力な遺伝子転写抑制。K562およびJurkat細胞に、Lonza 96ウェルシャトルシステムを用いて、dCas9-KRABまたはdCas9-SALL1-SDS3 mRNA(2 µg)、および、PPIBあるいはSEL1Lをターゲットとするプールフォーマット化学合成sgRNA(5 µM)を導入ました。WTC-11 hiPS細胞に、Lonza 96ウェルシャトルシステムを用いて、dCas9-KRABまたはdCas9-SALL1-SDS3 mRNA(1 µg)、および、PPPIBまたはSEL1Lをターゲットとするプールフォーマット化学合成sgRNA(3 µM)を導入しました。72時間後に細胞を回収しました。全RNAを単離し、RT-qPCRを使用して相対的な遺伝子発現を測定しました。各標的遺伝子の相対的な遺伝子発現は、ハウスキーピング遺伝子としてGAPDHを用いた∆∆Cq法で計算し、non-targetingコントロール(NTC)に対して正規化しました。