Edit-R lentiviral sgRNAポジティブコントロールおよびキット

ゲノム編集
ゲノム編集試薬
Edit-R lentiviral sgRNAポジティブコントロールおよびキット

Edit-R lentiviral sgRNAポジティブコントロールおよびキット

DNA二本鎖切断とゲノム編集効率を検証するためのlentiviral sgRNAコントロール

検証済みのEdit-R lentiviral sgRNAポジティブコントロールおよびキットにより挿入および欠失（indel）生成を確認し、DNAミスマッチ検出アッセイを使用してゲノム編集効率の定量化を可能にします。

検証済みのlentiviral sgRNAポジティブコントロールおよびキットにより、ゲノム編集イベントを検証します。

Edit-R lentiviral sgRNAポジティブコントロールおよびキットは、ヒトまたはマウスの遺伝子を標的とするように設計されており、単純なDNAミスマッチ検出アッセイを使用して標的ゲノムDNAの挿入および欠失（indel）の生成を観察することにより、形質導入が適切に行われたことを確認し、ゲノム編集実験の検証をすることができます。

個々のEdit-R lentiviral sgRNAポジティブコントロールは、グリセロールストックおよび濃縮精製レンチウイルス粒子（50 µL、1x10⁸ TU/mL）をご用意しています。ヒトまたはマウスで使用可能で、以下に対して設計されています。

Cyclophilin B (PPIB)
DNA (cytosine-5)-methyltransferase 3B (DNMT3B)

Edit-R lentiviral sgRNAポジティブコントロールキットには以下が含まれます。

レンチウイルス粒子またはグリセロールストック
DNAミスマッチ検出プライマー（フォワードおよびリバース）

Edit-R lentiviral CRISPR-Cas9ゲノム編集プラットフォームでは、天然のS. pyogenesシステムに基づく2つの重要なコンポーネント（Cas9発現用のベクター、目的の標的部位に合わせて設計されたsgRNA発現用の遺伝子特異的ベクター）が必要です。Cas9ヌクレアーゼとsgRNAを構成的に発現する細胞株の迅速な作製を促進するために、Cas9およびsgRNAベクターは、精製および濃縮されたレンチウイルス粒子にあらかじめパッケージ化されています。Cas9発現細胞株は、Edit-R レンチウイルスCas9ヌクレアーゼ発現粒子を使用して簡単に作製でき、その後の遺伝子ノックアウトは、sgRNAレンチウイルス粒子による追加の形質導入によって取得できます。

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Schematic maps and table of vector elements of the Edit-R Lentiviral Cas9 Nuclease (A) and sgRNA (B) vectors

The Edit-R Lentiviral CRISPR-Cas9 platform is a two-vector system that utilizes a lentiviral vector with multiple Pol II promoter options for maximal Cas9 expression and a gene-specific vector for sgRNA expression designed to the target site of interest. In the Edit-R Lentiviral sgRNA vector backbone, the gene-specific crRNA and the tracrRNA are expressed under the control of a human U6 promoter, while expression of the puromycin resistance marker (PuroR) is driven from the mouse CMV promoter and allows for rapid selection of cells with integrated sgRNA.

Schematic map of the plasmid vector elements of the Edit-R Lentiviral sgRNA vector

In the Edit-R Lentiviral sgRNA vector backbone, the gene-specific crRNA and the tracrRNA are expressed under the control of a human U6 promoter, while expression of the puromycin resistance marker (PuroR) is driven from the mouse CMV promoter and allows for rapid selection of cells with integrated sgRNA. The plasmid contains the AmpR resistance marker for growth and selection in E. coli.

Using Edit-R Lentiviral sgRNA Positive controls to detect varying levels of gene editing in HEK293T cells due to differential expression of Cas9 under the control of different promoters

Using Edit-R Lentiviral sgRNA Positive controls and a mismatch detection assay to test efficiency of gene editing in HEK293T cells show that the hCMV and CAG promoters result in the highest levels of editing. HEK293T cells were stably transduced with lentiviral particles containing Cas9 and a blasticidin resistance gene. A population of stably integrated cells were selected with blasticidin for a minimum of 10 days before transduction with sgRNAs. Cells were transduced with positive control sgRNA lentiviral particles at low MOI to obtain cells with one integrant and selected with puromycin for 7 days prior to analysis. The relative frequency of gene editing in the puromycin selected cells was calculated from DNA mismatch detection assay using T7 Endonuclease I.