当社のCRISPRiプラットフォームが新しいdCas9融合タンパク質と化学合成sgRNAを使用して、遺伝子の特徴付けとアレイ化されたスクリーニングのワークフローを改善します。
過去10年間、CRISPR-Cas9システムは遺伝子機能の解読に非常に役立つことが証明されてきました。CRISPR-Cas9は主に機能喪失（loss-of-function: LOF）研究で使用され、標的DNA切断部位での小さな挿入および欠失（insertions and deletions: INDELS）の作成によって遺伝子機能を破壊します。最近では、CRISPR転写活性化（CRISPRa）やCRISPR転写抑制（CRISPRi）などのCRISPR遺伝子発現調節システムが開発されました。これは、ヌクレアーゼ不活化Cas9（deactivated Cas9: dCas9）に依存して、転写活性化因子または転写抑制因子のいずれかを標的遺伝子に誘導し、転写を変化させます。
CRISPRシステムの、高度にプログラム可能で特異的ターゲティングにより、プール化レンチウイルススクリーニングが広く採用されるようになりました。このアプローチは、通常はsiRNAまたは低分子で実行されるアレイ化LOFスクリーニングを補完するものです。アレイ化スクリーニングでは、細胞のウェルごとに1つの遺伝子が標的とされますが、プール化スクリーニングでは、単一の細胞集団でひと揃えの遺伝子（ライブラリー）が標的とされます。アレイ化スクリーニングの利点は、遺伝子型と表現型の相関関係を明確に識別できること、マルチパラメータデータの生成、および短いタイムポイント実験への適合性などです1。CRISPR-Cas9システムはアレイ化スクリーニングに適用されてきましたが、CRISPRiの使用は限られています。
CRISPRiシングルガイドRNA（sgRNA）は一般にベクターベースであるため、大規模スクリーニングに必要なアレイ化ライブラリーを作製するには費用と時間がかかります。siRNAと同様に、sgRNAはハイスループットで化学合成され、多くの細胞タイプに容易に送達でき、安定性を高めるために化学修飾できる化学合成sgRNAのアレイ化ライブラリーを作製できます。ただし、化学合成sgRNAでCRISPRiを実行するには、アッセイの過程で十分な転写抑制が行われ、堅牢なLOF表現型が生成されるだけの強力なdCas9エフェクターが必要です。
