CRISPRa MS2 tracrRNA

SAM転写活性化システムと互換性のある化学合成tracrRNA（trans-activating CRISPR RNA）

化学合成CRISPRmod MS2 tracrRNA（以前の名称はSAM tracrRNA）は、CRISPRa化学合成crRNAとともに使用し、SAM転写活性化システムを含む安定した細胞での迅速かつ容易な遺伝子転写活性化を実現します。
dharmacon reagents

SAM（synergistic activation mediator）システムによる遺伝子転写活性化の場合、CRISPRa MS2 tracrRNA（以前の名称はSAM tracrRNA）をCRISPRa化学合成crRNAとともに使用して遺伝子転写活性化研究を行うことができます。MS2 tracrRNAは、最適化された公開済みのS. pyogenes tracrRNA配列に基づいて、化学的に合成され、HPLCで精製された長鎖RNA分子です（Jinek, 2012）。これには、SAMシステムのMS2-p65-HSF1コンポーネントに結合するMS2アプタマー配列も含まれています（Konermann et al., 2015）。

SAMシステムを使用した哺乳動物細胞における遺伝子転写活性化実験に必要な試薬：
  • SAM活性化システムにおける２つのコンポーネントを発現する安定細胞株（NLS-dCas9-VP64およびMS2-p65-HSF1）
  • CRISPRa MS2 tracrRNA
  • 標的遺伝子に対するデザイン済みCRISPRa 化学合成crRNA

 

crRNAおよびtracrRNAの注文数量ガイドライン

この表は、推奨されるcrRNA:tracrRNA作業濃度（25 nM:25 nM）で、まざまなプレート／ウェル形式でリピッドトランスフェクション法を実施できる概算の実験数を示しています。計算では、ピペッティングエラーは考慮されていません。crRNAライブラリの場合は、［ウェル数］x［nmol／ウェル］の計算式で、必要なtracrRNAの概算量を決定します。たとえば、ウェルあたり0.5 nmolの100ウェルライブラリーには、50 nmolのtracrRNAが必要です。大規模なライブラリプロジェクトには、バルクサイズのtracrRNAをお勧めします。

crRNA nmol tracrRNA nmol 96-well plate 100 µL reaction volume 24-well plate 500 µL reaction volume 12-well plate 1000 µL reaction volume 6-well plate 2500 µL reaction volume
2 2 800 160 80 32
5 5 2000 400 200 80
10 10 4000 800 400 160
20 20 8000 1600 800 320