RevvityのDharmacon all-in-oneレンチウイルスプラットフォームでは、CRISPRノックアウト（CRISPRko）、CRISPR遺伝子転写抑制（CRISPRi）、CRISPR遺伝子転写活性化（CRISPRa）のためのヒト全ゲノムライブラリーオプションを新たに追加しました。個々のall-in-one試薬と同様に、ヒト全ゲノムライブラリーは、CRISPRko、CRISPRa、CRISPRiのヒト全ゲノムプール化スクリーニングに必要な全てのコンポーネントを備えた単一のベクター・レンチウイルスシステムを利用するものです。
Dharmacon all-in-one CRISPRプラットフォームの利点
- 安定Cas9発現細胞株を作成する必要がないため、10～30日の大幅な時間短縮が可能
- 簡単なセットアップで何万もの遺伝子をターゲットにすることが可能（自動化不要）
- 通常、複数回のセレクションに耐性のない、トランスフェクションが困難な細胞や初代細胞で使用できる互換性の高いフォーマット
プラスミドライブラリーを使用する際に直面する以下のような課題を回避するために、当社の all-in-one CRISPR lentiviral ライブラリーをお試しください。
- ライブラリー増幅の回避：増幅ステップの効率は様々であり、sgRNAの発現に偏りが生じる可能性があります。バイアスを防ぐために、PCRサイクルを念頭に置いておくことが重要です。
- コロニーの成長を待つ必要なし：コロニーの成長を見失うと、コロニー間の競争により、さらにバイアスが生じる可能性があります。
- sgRNA配列を確認するためのNGSは不要 - しかもこれはスクリーニングプロセスを開始する前段階に必要となる場合があります。
- ウイルス汚染を回避する手順は不要：ウイルス調製物に汚染物質が含まれていないことを確認するため、レンチウイルスにパッケージングする前にエンドトキシンを含まないプラスミド精製を行う必要があります。
- 面倒なウイルスパッケージングは不要：選択バイアスを避けるため、開始前に抗生物質の使用量の至適化が必要です。レンチウイルスコンストラクトのランダムな統合は、遺伝子発現に位置効果をもたらし、機能スクリーニングの結果に影響を与える可能性があります。
- レンチウイルスプラスミドのトランスフェクションの条件最適化は不要：細胞毒性を最小限に抑えながら、感染効率を最大限に高めるための適切な細胞密度を決定します。
CRISPRノックアウト、CRISPR遺伝子転写活性化、CRISPR遺伝子転写抑制のためのall-in-one CRISPRレンチウイルスベクター
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このシステムは、S. pyogenes CRISPR-Cas9 ゲノム編集に必要なすべてのコンポーネントを含むレンチウイルス sgRNA ベクターです。各sgRNAベクターには、遺伝子特異的シングルガイドRNA（sgRNA）とCas9ヌクレアーゼが含まれています。さらに、このベクターは抗生物質耐性または蛍光ソーティングを可能にする2つの形態で利用可能です。このベクターは、培養中の 哺乳動物細胞にすぐに導入できるように、レンチウイルス粒子にパッケージされて供給されます。各技術の詳細については、上の図をご覧ください：Edit-R = CRISPRko, CRISPRmod dCas9-VPR = CRISPRa, CRISPRmod dCas9-SALL1-SDS3 = CRISPRi
タイトな分布と適切な表現率でスクリーニング結果の信頼性を確保
レンチウイルスのプール化スクリーニングにおいて、シングルガイドRNA（sgRNA）の高い発現率は、下のような理由から不可欠です。
- 特定の生物学的プロセスに関与する遺伝子を正確に同定するために重要な、多様な遺伝子カバレッジを保証します。
- sgRNA の高い発現率はサンプリングバイアスを最小化し、より信頼性の高い結果と遺伝子機能に関するより信頼性の高い結論を導きます。
- 優性なクローンの増殖を防ぎ、sgRNAライブラリーの多様性と実験結果の妥当性を維持します。
スクリーニングを成功させるには、適切な sgRNA を含む高品質のライブラリーから始める必要があります。そうすることで、偏りのない均一なスクリーニングが可能になります。
Dharmacon all-in-one CRISPR プラットフォームの詳細については、アプリケーションページまたは2024年10月22日に開催予定のライブウェビナーでご覧ください。ご登録いただくと、オンデマンド視聴も可能です。