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Accell siRNA試薬
トランスフェクションが困難な細胞における遺伝子ノックダウンを実現
トランスフェクション試薬やウイルスベクターを必要としないように修飾されており、トランスフェクションが困難な細胞用の新しいsiRNAです。デザイン済みAccell siRNAは、4種類のsiRNAを混合したSMARTpoolフォーマット、または1種類ごとの個別包装であるindividualフォーマットで入手できます。
Accell siRNA試薬
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あらゆる細胞タイプでRNAiを実現
Accell siRNAは、他のRNAi製品にはない優れた特徴があります。トランスフェクション試薬、ウイルス、または機器を使用せずトランスフェクションが困難な細胞にsiRNAを導入できます。トランスフェクション試薬または望ましくないウイルス反応によって引き起こされる毒性のために従来のRNAi製品では難しかった神経細胞、免疫細胞、または初代培養細胞で標的遺伝子ノックダウンを実現します。
- Accell siRNAは、トランスフェクション試薬、ウイルス(またはウイルスベクター)、または機器を必要とせずに細胞に導入できます。
- SMARTpoolおよびindividual siRNAの4つのうち3つによる遺伝子ノックダウンの保証(詳細は、Guaranteeタブをご確認ください)
- Accell siRNAが採用している新規の修飾は、取り込み、安定性、特異性、ノックダウン効率を向上します。
-
神経細胞、免疫細胞、初代培養細胞、およびその他のトランスフェクションが困難な細胞で性能が実証されています。
- 安定化修飾により、in vivoでの使用に適しています。
- Accell siRNAの最適化された連続投与による長時間のノックダウンが可能です。
実験的考察
Accell siRNAはsiRNAの導入における飛躍的な解決策でありトランスフェクション試薬は必要ありませんが、Accell siRNA特有の要件があります。
- Accell siRNAは従来のsiRNAよりも高濃度で機能します。推奨される作業濃度は1 µMです。
- 血清中のBSAの存在により、導入が阻害される可能性があります。無血清培地(専用のAccell Delivery Media)または血清2.5%以下を含む標準培地を使用した至適条件検討が推奨されます。
- 48時間のインキュベーション後にフル血清培地に戻すことが可能です。最適なmRNAノックダウンは、通常、72時間のインキュベーションで達成され、タンパク質ノックダウンは最大96時間のインキュベーションで達成されます。
製品フォーマット
- SMARTpool:標的遺伝子に対して設計した配列の異なる4種類のsiRNAを1本のチューブに混合したフォーマット。ノックダウン効率と特異性の両方で優れています。
- Set of 4:1つの遺伝子に対して設計した配列の異なる4種類のsiRNAをそれぞれ個別のチューブに入れ、チューブ4本で1セットとしたフォーマット
- Individual siRNA: 1種類(チューブ1本)ごとの個別包装で、実験に合わせて1、2、3または4つの個々のsiRNAを選択できます。
購入後にsiRNAターゲット配列情報が提供されます(製品に添付のデーターシートに記載)。
注文ガイドライン
1 µM siRNA濃度の場合の概算反応(ウェル)数。(ピペッティングエラーは考慮せず) | |||
---|---|---|---|
nmol | 96-well plate (100 µL total reaction volume) | 24-well plate (500 µL total reaction volume) | 12-well plate (1000 µL total reaction volume) |
1 | 10 | 2 | 1 |
2 | 20 | 4 | 2 |
5 | 50 | 10 | 5 |
10 | 100 | 20 | 10 |
Accell siRNAデリバリーのユニークな性質により、従来のsiRNAよりも高い作業濃度が必要です。この表は、さまざまなプレートフォーマットで推奨される1 μMのAccell siRNA作業濃度の場合の概算反応(ウェル)数を示しています。
カスタムsiRNAデザイン
siDESIGN centerを使用して、カスタムsiRNA配列の設計およびご注文が可能です。
siRNAノックダウン保証
Accell siRNA試薬(SMARTpoolフォーマットおよびindividualフォーマット4つのうち3つ)は、mRNAレベルで少なくとも75%までターゲット遺伝子発現をノックダウンすることが保証されています。
このAccell siRNAのブログで説明されているように、すべてのステップが評価され、実験条件の至適化が実施された場合に、SMARTpoolフォーマットおよびindividualフォーマット4つのうち3つによって標的遺伝子のmRNA発現レベルで最低75%の遺伝子発現抑制を保証します。テクニカルサポートに連絡し、推奨されるトラブルシューティングを実行した後、標的遺伝子が少なくとも75%ノックダウンされない場合、そのAccell SMARTpoolまたはSet of 4の交換製品が、1回限り無償で提供されます。
Accellコントロールは、Accell siRNAのデリバリー条件を効果的に最適化し、蛍光または非標識のポジティブコントロールおよびネガティブコントロールを用いることで、進行中の実験における変数を制御します。Accell Control Kitsは、トランスフェクションが困難な細胞におけるAccellテクノロジーの評価のために、種固有の検証済みコントロールを組み合わせたものです。
実験的考察
- Accell siRNAは従来のsiRNAよりも高濃度で機能します。推奨される作業濃度は1 µMです。
- 血清中の BSAの存在により、導入が阻害される可能性があります。無血清培地製剤(専用のAccell Delivery Media)または血清2.5%以下を含む標準培地中を使用した至適条件検討が推奨されます
- 48時間のインキュベーション後にフル血清培地に戻すことが可能です。最適なmRNAノックダウンは、通常、72時間のインキュベーションで達成され、タンパク質ノックダウンは最大96時間のインキュベーションで達成されます。
ハウスキーピング遺伝子を標的としたポジティブコントロール、蛍光標識または非標識ネガティブコントロール、またはAccell Control Kitから選択してください。Accell Control Kitは、初めてAccell siRNAを用いた実験を行う際の検討にお勧めします。
Accell Positive Control Reagents | Species | Catalog Number |
---|---|---|
Accell Cyclophilin B Control siRNA | Human, Mouse, Rat | D-001920-0Y |
Accell Cyclophilin B Control Pool | Human, Mouse, Rat | D-001920-Y0 |
Accell GAPD Control siRNA | Human, Mouse, Rat | D-001930-0Y |
Accell GAPD Control Pool | Human, Mouse, Rat | D-001930-Y0 |
Accell Green Cyclophilin B Control siRNA | Human, Mouse, Rat | D-001970-0Y |
Accell Red Cyclophilin B Control siRNA | Human, Mouse, Rat | D-001975-0Y |
Accell eGFP Control siRNA | N/A | D-001940-01 |
Accell eGFP Control Pool | N/A | D-001940-10 |
Accell Negative Control Reagents | Species | Catalog Number |
Accell Non-targeting siRNAs | Human, Mouse, Rat | D-001910-0X |
Accell Non-targeting Pool | Human, Mouse, Rat | D-001910-10 |
Accell Green Non-targeting siRNA | Human, Mouse, Rat | D-001950-01 |
Accell Red Non-targeting siRNA | Human, Mouse, Rat | |
Accell Control siRNA Kits | Species | Catalog Number |
Accell Control siRNA Kits (Green) | Human, Mouse, Rat | K-005000-G1-0Y |
Accell Control siRNA Kits (Red) | Human, Mouse, Rat | K-005000-R1-0Y |
Accell siRNAは、小脳切片の器官培養における効果的な取り込みとサイレンシングを示す
Accell siRNAは、インキュベーションを延長すると取り込みが増加します。250 μmの小脳切片を調製し、培養し、顕微鏡検査の前にAccell Red Non-targetingコントロール(NTC)siRNAとともに3時間(A)および72時間(B)インキュベートしました。
Accell siRNAは、培養されたP8マウス脳スライスの標的遺伝子を効果的にノックダウンする
培養脳スライスは、PPIBおよびGAPDHを標的とするAccell siRNAまたはnon-targeting(NTC)とのインキュベーション後に3つの時点(48、72、96時間)で評価され、タンパク質のレベルはウエスタンブロット分析を使用して評価されました(ローディングコントロールとしてアクチンを使用)。
心筋細胞におけるAccell siRNAデリバリーと遺伝子サイレンシング
新生児ラット心室筋細胞を、1 μMのAccell Green(A; カタログ番号:D-001950-01)またはRed(B; カタログ番号:D-001960-01)のnon-targeting siRNAとともにAccell delivery media(カタログ番号:B- 005000)で培養しました。核はDAPI(青)で染色されました。標識されたコントロールの取り込みは、ほぼすべての細胞でびまん性の細胞質局在を示しました。棒グラフは、Accell GAPDコントロールsiRNA(カタログ番号:D-001930-03)およびAccell GAPDコントロールプール(カタログ番号:D-001930-30)で達成された遺伝子ノックダウンのレベルを、新生児ラット心室筋細胞(NRVM)培地またはAccell delivery mediaで実施した場合を示しています。筋細胞は、Maass AH & Buvoli M著のCardiomyocyte preparation, culture, and gene transfer. Methods in Molecular Biology 2007;366: 321-30.に記載されているように調製しました。mRNA発現はQuantiGene branched DNA assay (Panomics)によって測定しました。
Accell siRNAアプリケーションプロトコールは、標的遺伝子ノックダウンを簡素化する
(1)Accell siRNAをAccell delivery media(または他の低血清または無血清培地)と混合
(2)培地をAccell delivery Mixnに置き換え、72時間培養
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