十分に計画された遺伝子ノックダウン実験は、特にトランスフェクションが難しい細胞株を使用する場合、機能的なノックダウン試薬を細胞に最適に導入し、遺伝子ノックダウンを正確に確認する必要があります。Horizonは、遺伝子ノックダウンを確実にするための実証済みの段階的な実験ワークフローを提供します。
RNAiノックダウンは、特定の表現型または疾患状態を特徴づけるための素晴らしいツールです。内因性の生物学的経路に基づいて、特定の遺伝子標的または定義された生物学的経路の詳細な研究、またはゲノム全体のハイスループットスクリーニングに使用できます。
RNAi実験の成功は、次の4つの重要なステップに依存しています。
- 機能的なsiRNAの利用
- siRNAの導入の最適化
- 遺伝子のダウンレギュレーションの検出
- 生物学的表現型の確認
従来の方法では、望ましい実験結果を得ることを妨げる可能性のあるさまざまな障壁があります。特に、免疫および神経学的研究で使用される多くの細胞株は、従来の脂質導入システムではsiRNAの導入を受けつけないため、siRNAの効果的な導入はしばしば困難です。
Horizonは、Accell siRNAテクノロジーを使用して、これらの課題のいくつかを克服し、最初の2つの段階を最適化することをお勧めします。
Accell siRNA workflow
この革新的なテクノロジーは、トランスフェクション試薬、ウイルスベクター、または機器なしで導入できる機能的で特異的なsiRNAを提供するものです。広範囲の「トランスフェクションが難しい」とされるヒト、ラット、およびマウス細胞株への効果的な導入をサポートします。
Horizonは、Accell siRNAを使用したRNAiノックダウンの最適化をサポートするための段階的な実験ワークフローを提供しています。これらの手順の後、ハイコンテントまたはエンドポイントアッセイを通じて、結果として得られる生物学的表現型の研究に自信を持って進むことができます。
Accell siRNAを介した遺伝子ノックダウンとmRNAノックダウンの検出のための実験ワークフロー
Accell Workflow
このワークフローの詳細については、Accellアプリケーションノートを参照してください。このワークフローに従った場合のsiRNAデリバリーとその後の遺伝子ノックダウンの成功は、トランスフェクションが難しい2つの細胞株（SH-SY5Y [接着性神経芽細胞腫細胞]とJurkat [サスペンションT細胞]）で実証されています。実験結果の要約は次のとおりです。
- 両方の細胞タイプの細胞質への色素標識siRNAの効果的な取り込みは、導入の24時間後に蛍光顕微鏡で観察しました（mRNAノックダウンを検出するための最適な時間は通常導入後72時間です）。
- どちらの細胞株もAccellにより生存率には影響なく、生存率は未処理の細胞と比較して95％以上でした。
- 2つの標的遺伝子（GAPDおよびPPIB）の発現は、SH-SY5Y細胞でそれぞれ95％および75％減少し、Jurkat細胞でそれぞれ93％および60％減少しました。対照的に、非標的ハウスキーピング遺伝子には有意な変化はありませんでした。
この推奨ワークフローに従うことで、「トランスフェクションが難しい」細胞株でも、RNAi実験が期待どおりに実行されるはずです。
これらの検証データと特定の方法論の詳細については、アプリケーションノート Successful RNA Interference Experiments in Difficult-to-Transfect Cell Lines.を参照してください。
Written by Christian Nievera, Ph.D., Product Manager
Christianは、Horizon DiscoveryのRNAiおよび機能ゲノミクススクリーニングライブラリのシニアプロダクトマネージャーです。彼は、抗体、siRNA、遺伝子編集ツール、PCR試薬などのさまざまなポートフォリオを管理するライフサイエンス業界で10年以上の経験があります。Christianは研究チームと協力して、新しい機能ゲノミクスツールを開発して市場に投入しています。 Christianはフロリダ工科大学で生物科学の博士号を取得しています。
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