Please note：crRNAへヌクレアーゼ耐性の安定化化学修飾が追加されたことに伴い、化学合成crRNAコントロールのカタログ番号が変更されていることに注意してください。これらの変更について詳しくは、featured articleをご覧ください。

Edit-R 化学合成crRNA non-targetingコントロールは、ヒトまたはマウス細胞でcrRNAを使用する実験のネガティブコントロールとして推奨されます。すべてのEdit-R non-targetingコントロールは、ヒトおよびマウスのゲノムのすべての潜在的なPAM隣接標的に対して、少なくとも3つのミスマッチまたはギャップを持つように設計されています。これらのコントロールで処理した細胞の生存率または遺伝子発現レベルの変化は、標的特異的crRNAで処理した細胞のレベルと比較できるベースラインの細胞応答をほぼ反映しています。

Highlights

• 独自のアライメントツールを使用して、ヒトまたはマウスのゲノムの潜在的な標的に対する少なくとも3つのミスマッチまたはギャップを検証します。
• 5つの異なるデザインから選択できるため、システムに検出可能な影響がないものを確実に見つけることができます。

注意：コントロールcrRNAにもtracrRNAが必要です。

Edit-R CRISPR-Cas9ゲノム編集

Dharmacon Edit-Rゲノム編集プラットフォームは、哺乳動物細胞の遺伝子を編集するように設計および適合させることができる細菌Streptococcus pyogenes由来のII型CRISPR-Cas9システムに基づいています。CRISPR-Casシステムのエンドヌクレアーゼ構成要素であるCas9が、CRISPR RNA (crRNA)とtrans-activating crRNA (tracrRNA)と呼ばれる2つのRNAと複合体を形成すると、DNAを切断する複合体が形成されます。この柔軟なシステムを利用して、部位特異的なゲノム修飾を誘導し、遺伝子機能をプログラムし、調節し、正確に調べることができます。

Dharmacon Edit-R CRISPR-Cas9化学合成crRNAプラットフォームは、天然のS. pyogenesシステムに基づいて、哺乳類細胞でのゲノム編集に3つのコンポーネントを必要とします。

• Cas9 nuclease：発現用プラスミド、タンパク質、mRNA、またはCas9ヌクレアーゼをコードする哺乳動物コドン最適化遺伝子配列を発現するレンチウイルスベクター
• 化学的に合成されたtrans-activating CRISPR RNA (tracrRNA)
• 目的の遺伝子標的部位に合わせて設計された化学合成CRISPR RNA (crRNA) 

crRNAおよびtracrRNA必要量