SMARTvector Lentiviralコントロール
SMARTvector shRNAを用いた実験の正確なデータ解釈を可能にするコントロール
遺伝子特異的なコンストラクトのSMARTvector Lentiviral shRNAまたはshMIMIC Lentiviral microRNAを注文する際には、目的の遺伝子またはmicroRNAを検索し、ご希望のプロモーターとレポーターを選択します。
初めに、SMARTchoice Promoter Selection Plateを使用して、ご使用の細胞に最適なベクター構成を特定してください。
SMARTchoice Promoter Selection Plate(カタログ番号SP-001000-01)を使用して、7つのプロモーターを同時に評価することにより、ご使用の細胞において最もアクティブなプロモーターを決定します。
- TurboGFP(Evrogen)の発現を駆動する7つの特徴の明確な恒常発現用の細胞プロモーター*を備えたSMARTvector Non-targeting コントロール(NTC)のアレイ化プレートです。
- パッケージ化、精製、および濃縮された高力価のレンチウイルス粒子です。
- レンチウイルス粒子は、複数のMOIをテストできるように、便利な96ウェル形式において2連希釈でアレイ化されています。
*一部のプロモーターオプションは、カスタム製品として、またはリクエストに応じてのみ利用できる場合があることに注意してください。
ご注文時は、遺伝子特異的コンストラクトと同一のプロモーターとレポーターのSMARTvector RNAiコントロールを選択してください。
SMARTvectorベクターコントロールは、7つのプロモーターと2つの蛍光レポーターまたは蛍光レポーター非搭載から選択できます。すべてのコントロールは大腸菌グリセロールストック、または精製・濃縮されたパッケージング済みレンチウイルス粒子((50 µL (2 x 25 µL), 1 x 108 TU/mL ± 20%、または100 µL (4 x 25 µL), 2 x 109 TU/mL ± 20%)として個別に提供しています。
SMARTvector non-targetingコントロール
- ヒト、マウス、ラットのゲノムに含まれる既知の遺伝子を最小限にターゲッティングすることが検証済みです。
- TurboGFPまたはTurboRFPの発現により形質導入効率を確認できます。
- SMARTvector shRNAおよびshMIMIC microRNAの配列特異的な効果を、非特異的な効果と区別できます。
実験的な考慮事項:
- SMARTvector non-targetingコントロール 1:Horizonで最も長く、最も一般的に使用されているSMARTvector non-targetingコントロールです。ほとんどの実験をサポートするのに理想的です。
- SMARTvector non-targetingコントロール 2~12:フォローアップ実験で異なる non-targetingコントロール配列を使用する必要がある場合用に特別に設計されています。複数のコントロールが必要な場合にご選択ください。
SMARTvectorポジティブコントロール
- ヒト、マウス、ラットの細胞で、必須ではなく大量に発現するハウスキーピング遺伝子の一貫した強力なノックダウンを提供します。
- SMARTvector GAPDポジティブコントロール:glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase(GAPDH)をターゲットとし、ノックダウン検証済みのSMARTvector Lentiviral shRNA
- SMARTvector PPIBポジティブコントロール:peptidylprolyl isomerase B(cyclophilin B)をターゲットとし、ノックダウン検証済みのSMARTvector Lentiviral shRNA
SMARTvector Lentiviral shRNA実験ワークフロー
SMARTvector Lentiviral shRNA実験ワークフローは、 SMARTchoice Promoter Selection Plate を使用して形質導入された細胞のTurboGFP蛍光強度を評価し、目的の細胞において最もアクティブな RNAポリメラーゼIIプロモーターを特定することから始まります。次に、遺伝子特異的なSMARTvector Lentiviral shRNAおよび、それと同一のベクター構成(同じRNAポリメラーゼIIプロモーターとレポーター)を持つポジティブおよびネガティブコントロールを注文します。目的の遺伝子を標的とするSMARTvector Lentiviral shRNAを細胞に形質導入する際には、厳密なデータ解釈のために、同一のベクター構成のポジティブおよびネガティブのRNAiコントロールと常に同時にアッセイすることが必要です。SMARTvector Lentiviral shRNAおよびRNAiコントロールは、即時形質導入用の高力価の精製および濃縮レンチウイルス粒子として提供されます(大腸菌グリセロールストックフォーマットも有り)。
SMARTvector Lentiviral shRNAコントロール粒子は細胞株全体で一貫した結果をもたらす
Figure 1. SMARTvector Lentiviral shRNAコントロール:Non-TargetingコントロールとGAPDをターゲットとしたSMARTvector Lentiviral コントロールshRNAをK562、HUVEC、およびSH-SY5Y細胞に3つのMOIで形質導入し、branched DNAアッセイ(Panomics, Inc.)を使用して形質導入の72時間後にmRNAノックダウンを評価しました。
Application notes
Technical manuals
Related Products
SMARTchoice Promoter Selection目的の細胞に最適なプロモーターを特定することで、レンチウイルスshRNAおよびshMIMIC microRNAの機能と性能を向上させることができます。
最先端のshRNAデザインによる遺伝子ノックダウンが保証され、複数のプロモーターおよびレポーターオプションが選択可能です。
Package 2nd or 3rd generation viral vectors with high efficiency. Lentiviral packaging kits with calcium phosphate provide lower cost and higher-efficiency viral packaging along with premium biosafety.