プール化レンチウイルススクリーニング用ライブラリー

アッセイの開発と最適化
（a）レンチウイルスの形質導入や（b）スクリーニングパラメータ（選択圧、コントロールサンプルと実験サンプルの収集の間の時間など）など、最適な実験条件を確立します。

一次スクリーニング
細胞あたり1種類のshRNA/microRNA配列を発現させるために、レンチウイルスを低いMOIで細胞に感染させます。次に、形質導入された細胞をコントロール集団と実験集団に分割して、目的の表現型を誘導する選択圧を適用します。ゲノムDNA（gDNA）を、形質導入された細胞のコントロールおよび実験集団それぞれから抽出します。Illumina-adapted プライマーおよびPhusion Hot Start II High-Fidelity DNA Polymeraseを用いて、ゲノム中に挿入されたshRNA/microRNA配列をPCR増幅し、アダプター付加したPCR増幅断片をillumina flow cell に固定化します。結果的に生じるアンプリコンをIlluminaシーケンサーによりシーケンシングします。

ヒットの特定とフォローアップ
スクリーニング中に増減したshRNA/microRNA配列をヒットと見なし、それらヒットshRNAがターゲットとする遺伝子あるいは該当するmicroRNAを同定します。Dharmaconカタログコレクションから注文できる個別のコンストラクトを使用して、ヒットを検証し、さらに調査することができます。

• SMARTvector Lentiviral shRNAプール化スクリーニング用ライブラリー
  最適化された機能解析スクリーニングのための構成的shRNA発現

• SMARTvector Inducible Lentiviral shRNAプール化スクリーニング用ライブラリー
  調節可能でコントロールされた機能解析スクリーニングのための誘導性shRNA発現

• shMIMIC Lentiviral microRNAプール化スクリーニング用ライブラリー
  ハイスループットの自動化を必要とせずに、数百または数千のmicroRNAの機能スクリーニングを実行します。

• shMIMIC Inducible Lentiviral microRNAプール化スクリーニング用ライブラリー
  microRNA発現を誘導的に制御し、数百または数千のmicroRNAの強力な機能スクリーニングを実行します。

• SMARTvector Indexing PCR and Sequencing Primer Kit
  Illumina社NGSでSMARTvectorおよびshMIMICプールライブラリーと共に使用します。

Learn more about Custom Pools

SMARTvector lentiviral shRNA、SMARTvector Inducible Lentiviral shRNA、shMIMIC Lentiviral microRNA、shMIMIC Inducible Lentiviral microRNA、またはヒト、マウス、またはラット用のGIPZコンストラクト（利用可能な場合）から選択できます。

• 利用可能なプールサイズ：50～10,000コンストラクト
• プールは、精製され濃縮されたレンチウイルス粒子として提供されます（構成ベクターの場合は5 x 10⁸ TU/mL以上、誘導ベクターの場合は1 x 10⁷ TU/mL以上）。
• レンチウイルス粒子の量を選択します（最小量100 μL）。
• ウイルス産生の前に、プールはNGS分析によってコンストラクトの回収と均一性について分析します。
• コンストラクト配列、RefSeq遺伝子アクセッション、Entrez遺伝子IDまたはmiRBase遺伝子IDを含むデータファイルを提供します。

検証済みのプール化レンチウイルススクリーニングプロトコールで推奨しているHorizon製品：

• トランスダクション最適化のためのnon-targetingコントロールレンチウイルス
• Vector-specific Indexing PCRおよびSequencing Primer Kitsには、最適化され、実験的に検証されたプライマーを含む
• バイアスを最小限に抑えた効率的なゲノムDNAのPCR増幅
• ヒット同定のためのハイスループットマルチプレックスシーケンシング
• プール化レンチウイルススクリーニングを成功させるための実験的にテストされたプロトコールと計画ツール

見積もりをリクエストする前に、次のマニュアルやツールをダウンロードして、プール化レンチウイルススクリーニングを慎重に計画し、必要なコンポーネントの量を計算することが非常に重要です。

• Pooled Lentiviral Screening Libraries Technical Manual
• Laboratory Protocols and Calculation Tracking Worksheet 
• Bioinformatics documentation 

重要なお知らせ

プール化レンチウイルススクリーニング用ライブラリーおよび試薬は、以下に示す封じ込め措置および適用される法律および規制が満たされている研究所での内部研究使用のみを目的としています（製品利用規約に規定されているとおり）。製品は、診断、治療、またはその他の商業目的で使用することはできません。また、ヒトに対してはいかなる目的であっても投与することはできず、動物に対しては治療目的で投与することはできません。レンチウイルス粒子として提供されるすべてのプール化レンチウイルススクリーニング用ライブラリーは、複製能力がなく、自己不活化（self-inactivating: SIN）であり、非病原性（感染性ヒト疾患を引き起こさない）です。

レンチウイルス粒子製品を購入する研究者は、レンチウイルスベクター粒子の取り扱いに関する特定のガイドラインについて、所属機関の健康およびバイオセーフティ担当者と相談する責任があります。さらに、各研究者は、複製能のないSINレンチウイルスベクターおよび複製欠損レンチウイルス粒子を使用した研究について、その地域の管轄区域および機関における必要な許可を取得する全責任を負います。