Dharmaconによる脂質ベースのトランスフェクション試薬は、低分子RNAトランスフェクション（DharmaFECT 1-4）、プラスミドと低分子RNAの同時トランスフェクション（DharmaFECT Duo ）、およびプラスミドトランスフェクション（ DharmaFECT kb）用に特別に設計されています。
遺伝子調節実験（RNAi、過剰発現、ゲノム編集、またはCRISPR遺伝子発現調節）における重要な成功要因の1つは、細胞株またはin vivoシステムへのRNAおよび／またはDNAコンポーネントの導入です。脂質ベースのトランスフェクション試薬を適用する場合、効果的なトランスフェクション試薬の3つの一般的な対策があります。
- 高い導入効率
- 低い細胞毒性
- 汎用性
表は、ご研究に適したDharmaFECT試薬の選択の参照となるトランスフェクションの推奨事項を示しています。DharmaFECT Cell Type GuideのPDF版は、こちらからダウンロードすることもできます。
Human |
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|---|---|---|---|---|---|
| Cell line | Cell type | Recommended DharmaFECT reagent |
DharmaFECT μL/well |
Plating density (cells/well) |
Other successful formulations |
| 786-0 | Kidney adenocarcinoma | 1 | 0.4 | 5 × 103 | 2 |
| A549 | Lung carcinoma | 1 | 0.2 | 1 × 104 | 2, 3, 4 |
| ARPE-19 | Retinal pigment epithelial | 4 | 0.2 | 1 × 104 | 1,2 |
| BxPC3 | Pancreas adenocarcinoma | 2 | 0.2 | 5 × 103 | 1, 3, 4 |
| DLD-1 | Colorectal adenocarcinoma | 2 | 0.4 | 5 × 103 | 1,3 |
| DU 145 | Prostate carcinoma | 1 | 0.2 | 1 × 104 | 2, 3, 4 |
| NCI-H1299 | Lung carcinoma | 2 | 0.2 | 1 × 104 | 4 |
| HCT-116 | Colorectal carcinoma | 2 | 0.1 | 5 × 103 | 4 |
| HEK293 | Kidney transformed embryonic cells | 1 | 0.2 | 1 × 104 | 2, 4 |
| HeLa | Cervical epithelial adenocarcinoma | 1 | 0.2 | 5 × 103 | 2, 3, 4 |
| HeLa S3 | Cervical epithelial adenocarcinoma | 4 | 0.4 | 5 × 103 | 1, 2, 3 |
| Hep G2 | Hepatocellular carcinoma | 4 | 0.4 | 1 × 104 | 1, 2 |
| hMSC | Mesenchymal stem cells | 1 | 0.4 | 5 × 103 | 2, 3, 4 |
| HT-29 | Colorectal carcinoma | 1 | 0.2 | 5 × 103 | 2, 3, 4 |
| HT1080 | Fibrosarcoma | 4 | 0.2 | 5 × 103 | 1, 2, 3 |
| Huh7 | Hepatocarcinoma | 4 | 0.05 | 5 × 103 | 1, 2 |
| HUVEC | Umbilical vein endothelial cells | 4 | 0.2 | 2 × 104 | 1, 2 |
| JEG-3 | Placenta, choriocarcinoma, epithelial | 3 | 0.2 | 1 × 104 | |
| LNCaP | Prostate carcinoma | 3 | 0.2 | 1 × 104 | 1 |
| MCF | Breast adenocarcinoma | 1 | 0.2 | 1 × 104 | 2, 4 |
| MCF 10A | Breast adenocarcinoma | 1 | 0.2 | 1 × 104 | 2 |
| MDA-MB-453 | Breast adenocarcinoma | 2 | 0.2 | 1 × 104 | 1, 3, 4 |
| MDA-MB-231 | Breast adenocarcinoma | 4 | 0.1 | 5 × 103 | 1 |
| OVCAR3 | Ovarian adenocarcinoma | 1 | 0.1 | 5 × 103 | 2, 3, 4 |
| PC-3 | Prostate carcinoma | 2 | 0.2 | 1 × 104 | 3 |
| Saos-2 | Bone, osteosarcoma, epithelial | 1 | 0.05 | 1 × 104 | 2,3,4 |
| SK-BR-3 | Breast adenocarcinoma | 2 | 0.2 | 1 × 104 | 1, 3, 4 |
| SKOV-3 | Ovarian adenocarcinoma | 3 | 0.4 | 1 × 104 | 1, 2, 4 |
| U-87 MG | Brain glioblastoma | 1 | 0.1 | 5 × 103 | 2, 3, 4 |
Rodent |
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| Cell line | Cell type | Recommended DharmaFECT |
DharmaFECT μL/well |
Plating density (cells/well) |
Other successful formulations |
| A7r5 | Rat aortic smooth muscle | 2 | 0.1 | 5 × 103 | 1 |
| C2C12 | Mouse myoblasts | 1 | 0.2 | 5 × 103 | 2, 3, 4 |
| CHO K1 | Chinese hamster ovary | 4 | 0.8 | 1 × 104 | 1, 2 |
| ES-D3 | Mouse embryonic stem cells | 1 | 0.2 | 2 × 103 | 2 |
| ES-E14TG2a | Mouse embryonic stem cells | 1 | 0.2 | 2 × 103 | 2 |
| H9c2 | Rat myoblasts | 1 | 0.2 | 1 × 104 | 2, 3, 4 |
| J774A.1 | Mouse macrophages | 4 | 0.2 | 1 × 104 | - |
| NIH/3T3 | Mouse embryonic fibroblasts | 1 | 0.2 | 1 × 104 | 3 |
| NRK-49F | Rat kidney fibroblasts | 2 | 0.2 | 1 × 104 | 1, 4 |
| Rat2 | Rat fibroblasts | 1 | 0.2 | 2 × 104 | 2 |
| 3T3-L1 | Mouse embryonic fibroblasts | 1 | 0.2 | 5 × 103 | 3 |
Other |
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| Cell line | Cell type | Recommended DharmaFECT |
DharmaFECT μL/well |
Plating density (cells/well) |
Other successful formulations |
| COS-7 | African green monkey kidney | 2 | 0.4 | 5 × 103 | 1, 3, 4 |
すべての実験条件で、細胞生存率とポジティブコントロール遺伝子サイレンシングが80%以上になりました。すべての実験は、25 nMのnon-targetingコントロールsiRNAおよびPPIB（Cyclophilin B）またはGAPDコントロールプールを含む96ウェルプレートで行い、24 時間後に細胞生存率（Alamar Blue使用）およびノックダウンを測定しました。データは、生存率については非トランスフェクションに対して、ノックダウンについては非トランスフェクションおよびnon-targetingコントロールの両方に対して正規化されています。トランスフェクション条件は、新しいプレートフォーマットまたは細胞密度に関するアッセイ固有の要件に照らして常に再評価する必要があります。
Order DharmaFECT reagents
DharmaFECT 1
最適な低分子RNAトランスフェクションのための最も汎用性のあるDharmaFECT試薬 - 35種類以上の細胞で検証済み
DharmaFECT 2
DharmaFECT 1、3、4とは化学的に異なる処方の低分子RNAトランスフェクション試薬 - 特定の細胞株にのみ推奨
DharmaFECT 3
DharmaFECT 1、2、4とは化学的に異なる処方の低分子RNAトランスフェクション試薬 - 特定の細胞株にのみ推奨
DharmaFECT 4
DharmaFECT 1、2、3とは化学的に異なる処方の低分子RNAトランスフェクション試薬 - 特定の細胞株にのみ推奨
DharmaFECT set of 4
細胞および実験条件に最適な試薬を決定するための4つのDharmaFECT製剤のそれぞれの小分け製品
DharmaFECT duo
低分子RNAとプラスミドの同時トランスフェクション用
DharmaFECT kb
最小限の細胞毒性でプラスミドDNAを効率的にトランスフェクションします。
Helpful Resources
DharmaFECT 1
最適な低分子RNAトランスフェクションのための最も汎用性のあるDharmaFECT試薬 - 35種類以上の細胞で検証済み
DharmaFECT 2
DharmaFECT 1、3、4とは化学的に異なる処方の低分子RNAトランスフェクション試薬 - 特定の細胞株にのみ推奨
DharmaFECT 2
DharmaFECT 1、3、4とは化学的に異なる処方の低分子RNAトランスフェクション試薬 - 特定の細胞株にのみ推奨
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Contact usDharmaFECTトランスフェクション試薬によって導入されるEdit-R Cas9 Nucleaseタンパク質NLSを使用したU2OS-(Ubi)EGFP細胞におけるPSMD7遺伝子の編集
U2OS-(Ubi)EGFP細胞を96ウェルプレートに10,000細胞／ウェルで播種し、25 nM Edit-R Cas9 Nucleaseタンパク質NLSおよびPSMD7をターゲットとする50または100 nMの化学合成crRNA:tracrRNAを、DharmaFECTトランスフェクション試薬を使用して同時トランスフェクトしました。トランスフェクションの72時間後に細胞を回収し、T7エンドヌクレアーゼ Iを使用したDNAミスマッチ検出アッセイに基づいてゲノム編集の相対頻度を計算しました。UT = 未処理サンプル、MW = FastRuler Low Range DNA Ladder (Thermo Scientific)
DharmaFECTトランスフェクション試薬によって導入されるEdit-R Cas9 Nuclease mRNAを使用したHEK293T細胞におけるVEGFA遺伝子の編集
HEK 293T細胞を96ウェルプレートに20,000細胞／ウェルで播種し、200 ngのEdit-R-Cas9 mRNAおよびVEGFAをターゲットとする化学合成crRNA:tracrRNAを、DharmaFECTトランスフェクション試薬を使用して同時トランスフェクトしました。トランスフェクションの72時間後に細胞を回収し、T7エンドヌクレアーゼ Iを用いたDNAミスマッチ検出アッセイに基づいてゲノム編集の相対頻度を計算しました。DF1 = DharmaFECT 1、Duo = DharmaFECT Duo、UT = 未処理サンプル、MW = FastRuler Low Range DNA Ladder (Thermo Scientific)
DharmaFECT試薬はダイナミックレンジを改善する
DharmaFECT試薬は、Lipofectamine® 2000 （Invitrogen）と比較して、より幅広い実験条件で効果的です。いくつかの細胞密度と脂質量を調べて、最適なトランスフェクション条件を決定しました。影付きのボックスで示されています。Lipofectamine® 2000およびDharmaFECT 4トランスフェクション試薬の一定範囲の容量（0.05～1.6μL／ウェル）を使用して、3つの細胞密度のHepG2細胞にGAPD siRNA（100nM）をトランスフェクトしました。mRNAレベル（青棒）は分岐DNAアッセイ（Panomics Quantigene® Reagent System）によって評価され、細胞生存率（折れ線）はalamarBlue®（Biosource International）によって決定されました。
DharmaFECTトランスフェクション試薬は、低濃度のsiRNAで非常に効率的な導入を実現する
低siRNA濃度でのトランスフェクション効率を決定するために、さまざまな量のSMARTpool siRNA試薬を用いて2つの遺伝子のノックダウンを試験しました。DharmaFECT はすべてのsiRNA濃度で80%を超えるノックダウンを達成しましたが、HiPerFect（Qiagen）は100 nMのPPIBでのみこのレベルを達成しました。HeLa細胞は、シクロフィリン B（PPIB）またはMAPKIをターゲットとするSMARTpool TM試薬を1、5、25、および100 nMの濃度でトランスフェクトしました。mRNA発現（棒）は分岐DNAアッセイ（Panomics Quantigene® Reagent System）によって決定され、細胞生存率（折れ線）はalamarBlue®（Biosource International）によって決定されました。
DharmaFECTは、最適化研究において他の試薬よりも優れている
Borawskiらの論文からの表。Novartisの科学者による研究では、384ウェル形式でのトランスフェクション最適化（スクリーニングの準備）において、4つのDharmaFECTトランスフェクション試薬の1つが、10の細胞株のうち9つで、デリバリー効率と全体的な細胞生存率において他のすべての試薬よりも優れていると結論付けました。試験した脂質トランスフェクション試薬は、DharmaFECT 1-4、HiPerFect® (Qiagen)、TransIT-TKO® (Mirus)、Lipofectamine® 2000、およびOligofectamine® (Invitrogen)でした。J. Borawski et al., Optimization Procedure for small interfering RNA Transfection in a 384-well format. J. Bimolecular Screening,12, 546-559 (2007).
ポジティブコントロールsiRNAまたは当社の新しいトランスフェクションインジケーターから選択してください。
| siGLO Positive Control Reagents | Species | Catalog Number |
|---|---|---|
| siGLO Cyclophilin B Control siRNA | Human, Mouse, Rat | D-001610-01 |
| siGLO Lamin A/C siRNA | Human, Mouse, Rat | D-001620-01 |
| siGLO Lamin A/C Control siRNA | Human | D-001620-02 |
| siGLO Lamin A/C Control siRNA | Mouse | D-001620-03 |
| siGLO Lamin A/C Control siRNA | Rat | D-001620-04 |
| siGLO Negative Control Reagents | Species | Catalog Number |
| siGLO RISC-Free Control | Human, Mouse, Rat | D-001600-01 |
| siGLO Transfection Indicators | Species | Catalog Number |
| siGLO Green Transfection Indicator | Human, Mouse, Rat | D-001630-01 |
| siGLO Red Transfection Indicator | Human, Mouse, Rat | D-001630-02 |
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DharmaFECT 1 トランスフェクション試薬
RNAi実験を成功させるために、幅広い種類の細胞に最適なsiRNAまたはmicroRNAをトランスフェクションするための、最も汎用性のあるDharmaFECT試薬。DharmaFECT 1は、35種類以上の細胞で検証されています。
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DharmaFECT 2 トランスフェクション試薬
DharmaFECT 1、3、4とは化学的に異なる処方のsiRNA/microRNAトランスフェクション試薬 - 特定の細胞株にのみ推奨
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DharmaFECT 3 トランスフェクション試薬
DharmaFECT 1、2、4とは化学的に異なる処方のsiRNA/microRNAトランスフェクション試薬 - 特定の細胞株にのみ推奨
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DharmaFECT 4 トランスフェクション試薬
DharmaFECT 1、2、3とは化学的に異なる処方のsiRNA/microRNAトランスフェクション試薬 - 特定の細胞株にのみ推奨
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DharmaFECT Set of 4 トランスフェクション試薬
siRNA/microRNAトランスフェクション最適化試験のために4種類のDharmaFECT試薬のそれぞれの小分け製品がセット化されています。細胞や特定の実験条件に最適な試薬を決定するのにご使用いただけます。
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DharmaFECT Duo トランスフェクション試薬
信頼性の高い低分子RNAとプラスミドの同時トランスフェクション用
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DharmaFECT kb トランスフェクション試薬
最小限の細胞毒性でプラスミドDNAを効率的にトランスフェクションします。