Edit-R デザイン済みsynthetic sgRNA(化学合成sgRNA)
効率的な遺伝子ノックアウトと高い特異性を提供する化学合成シングルガイドRNA
- 目的のターゲット遺伝子の編集(DNA切断)が保証されています。
- 機能的タンパク質ノックアウトの可能性をアルゴリズムで最大化し、オフターゲット編集を最小化するようにデザインされています。
- トランスフェクションに対応した化学合成RNAにより、クローニングとin vitro転写ステップが不要です。
- ヌクレアーゼ耐性を改善するために、化学修飾が導入されています。
Note:すべてのデザイン済みガイドRNAは、予想されるノックアウトパフォーマンスの順にランク付けされています。

Edit-R predesigned synthetic sgRNA gene search
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化学合成シングルガイドRNAは、効率的な遺伝子ノックアウトと高い特異性を提供します。
Edit-Rのデザイン済み化学合成sgRNAは、S. pyogenes由来Cas9ヌクレアーゼを用いたゲノム編集に用いられ、目的のゲノム領域においてCas9を介したDNA二本鎖切断を起こす化学合成ガイドRNAです。
すべてのEdit-R ガイドRNAは、挿入または欠失を起こすだけでなく、機能的なタンパク質ノックアウトを効率的に生成するようにアルゴリズムによりデザインされています。さらに、すべてのEdit-R 化学合成ガイドRNA製品には化学修飾が導入されおり、ヌクレアーゼによる分解が減少するため、全体的なゲノム編集性能が向上しています。
このような他に類を見ない正確性と効率により、Edit-Rのデザイン済み化学合成sgRNAは、パスウェイ分析や化学合成sgRNAライブラリースクリーニングからのヒットのフォローアップに理想的なツールになります。詳細については、featured articleをご覧ください。
化学合成sgRNAを使用したEdit-R CRISPR-Cas9ゲノム編集実験に必要なコンポーネント:
• Cas9ヌクレアーゼ(タンパク質、mRNA、発現用プラスミド、発現用レンチウイルスベクター)
• 目的の遺伝子を標的としてデザインされたEdit-R 化学合成sgRNA
大規模な実験には:ヒトゲノムおよび遺伝子ファミリー全体のスクリーニングのためのデザイン済み化学合成sgRNAライブラリー のアレイ化コレクションをご参照ください。
Edit-R デザイン済みガイドRNA保証
すべてのデザイン済みEdit-RガイドRNAは、Edit-Rテクニカルマニュアルに記載されているとおりに細胞導入した場合に、ターゲット領域で編集(DNA切断)できることを保証します。
Edit-RガイドRNA保証は、野生型S. pyogenes由来Cas9ヌクレアーゼ(タンパク質、mRNA、発現用プラスミド、または発現用レンチウイルスベクター)とともに使用した場合に適用されます。
T7EIまたはSurveyorミスマッチ検出アッセイを使用して、試薬で処理された細胞集団の編集の分析結果を提示する必要があります。同時並行で適切に実施されたEdit-R ポジティブコントロールが成功する一方で、Edit-Rデザイン済みガイドRNAによる編集が成功しない場合、同じフォーマットで同じ容量の、異なるEdit-Rデザイン済みガイドRNAの交換製品が、1回限り無償で提供されます。
交換製品の提供は、テクニカルサポートチームとの話し合いでのみ承認されます。
DNAレベルでの編集(DNA切断)の成功は、常に機能的な遺伝子ノックアウトにつながるとは限りません。複数のガイドRNAをテストして、標的遺伝子のノックアウトに最も効果的なガイドRNAを決定することをお勧めします。
この保証は付随する実験費用には適用されず、CRISPR Design Toolを介して注文されたガイドRNAには適用されず、また本保証により交換したガイドRNAには適用されません。
Edit-R 化学合成sgRNAコントロール
-
ポジティブコントロールと検出プライマー
特徴のはっきりした遺伝子を標的とする種特異的な化学合成sgRNAおよびミスマッチ検出アッセイプライマーを使用して、ゲノム編集効率を最大化する実験条件を検討します。
-
Non-targetingコントロール
標的遺伝子特異的sgRNAの非存在下でCRISPR-Cas9コンポーネントに対するベースラインの細胞応答を評価するためのnon-targetingコントロールです。
サポートデータ
sgRNA必要量
下表は、gRNAワーキング濃度(25nM)を用いて、さまざまなプレート/ウェル形式でリピッドトランスフェクション法を実施できる概算の実験数を示しています。計算では、ピペッティングエラーは考慮されていません。
sgRNA nmol | 96-well plate 100 µL reaction volume | 24-well plate 500 µL reaction volume | 12-well plate 1000 µL reaction volume | 6-well plate 2500 µL reaction volume |
---|---|---|---|---|
2 | 800 | 160 | 80 | 32 |
5 | 2000 | 400 | 200 | 80 |
10 | 4000 | 800 | 400 | 160 |
CD4 + T細胞に、標的遺伝子あたり単一のデザイン済み化学合成sgRNAを用いた、タンパク質ノックアウトのフローサイトメトリー分析
Lonza 96-well Shuttleシステムにより、初代ヒトCD4 + T細胞に、標的遺伝子ごとに設計した個別のデザイン済み化学合成sgRNAまたはNon-targetingコントロール(NTC)とCas9からなるRNPをヌクレオフェクションしました。72時間後、FACS分析により、CD28、CD3E、およびCXCR3の機能的ノックアウトを、標的遺伝子を発現していない細胞の割合として評価しました。細胞のCD4発現をAlexa Fluor 488標識抗体で染色して正規化し、APC標識一次抗体を使用してターゲットであるCD28、CD3E、およびCXCR3を比較しました。
CD4 + T細胞に、標的遺伝子あたり単一のデザイン済み化学合成sgRNAを用いた、タンパク質ノックアウトのフローサイトメトリー分析

Lonza 96-well Shuttleシステムにより、初代ヒトCD4 + T細胞に、標的遺伝子ごとに設計した個別のデザイン済み化学合成sgRNAまたはNon-targetingコントロール(NTC)とCas9からなるRNPをヌクレオフェクションしました。72時間後、FACS分析により、CD28、CD3E、およびCXCR3の機能的ノックアウトを、標的遺伝子を発現していない細胞の割合として評価しました。細胞のCD4発現をAlexa Fluor 488標識抗体で染色して正規化し、APC標識一次抗体を使用してターゲットであるCD28、CD3E、およびCXCR3を比較しました。
化学合成sgRNAの混合物(プール)によるFUS遺伝子の機能的ノックアウト

FUSの機能的ノックアウトを、CAGプロモーター下でCas9を恒常的に発現するU2OS細胞で評価しました。0.04 µL DharmaFECT 4を用いて、FUSをターゲットとする3つの異なるEdit-R デザイン済みsgRNAプール(25 nM)を細胞にトランスフェクトしました。トランスフェクションから96時間後に細胞固定後、FUSを標的とする一次抗体およびAlexa Fluor 488蛍光標識二次抗体で染色しました。核識別のためにHoechst染色を使用しました。
化学合成sgRNAはあらゆるタイプのCas9ヌクレアーゼと互換性があります。表に適切なトランスフェクション条件を示します。
Cas9 nuclease expression |
Recommended transfection reagent |
---|---|
化学合成ガイドRNAのトランスフェクション用のDharmaFECT 1, 2, 3, 4 |
|
プラスミドおよび化学合成ガイドRNAの同時トランスフェクション用のDharmaFECT Duo |
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mRNAまたはタンパク質と化学合成ガイドRNAの同時トランスフェクション用のDharmaFECT Duo |
Application notes
Product data
Protocols
Safety data sheets
Selection guides
Technical manuals
Related Products
精製済みCas9 nuclease protein NLSは、Edit-R化学合成ガイドRNAとのコトランスフェクションで使用することにより、完全にDNA-freeのゲノム編集実験を行うことができます。
精製済みCas9 nuclease mRNAは、Edit-R化学合成ガイドRNAとのコトランスフェクションで使用することにより、完全にDNA-freeのゲノム編集実験を行うことができます。
ポジティブコントロールsgRNAを用いて、最適なゲノム編集条件を検討します。ミスマッチ検出アッセイプライマーとのキット製品もご用意しています。