Arrayed siRNA screens are a powerful tool to look at very precise perturbations in cellular pathways.
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3D culturing is a valuable and increasingly popular cell culture technique. This model recapitulates some physiological characteristics of tissues and tumors driven by cell-cell and cell-matrix contacts, circumventing the need for in vivo experiments in some cases.
間葉系から上皮系への移行（MET）の維持に関与する遺伝子を対象に、3つのLOF技術（CRISPRko、CRISPRi、siRNA）による直交標的検証戦略を採用した研究を紹介します。
信頼性が高く一貫した品質の試薬は、実験の成功と再現性にとって重要です。Dharmacon RNAおよびDNAオリゴヌクレオチド合成がどのようにそのレベルの品質を実現しているか、および実験で予期しない結果を調査するためのトラブルシューティングのヒントをブログにまとめました。
オフターゲット効果の存在は、実験データの解釈を非常に複雑にする場合があります。Dharmacon™ ON-TARGETplus™ siRNAおよびCRISPRmod CRISPRiシステムは、オフターゲット効果を最小限に抑えて標的遺伝子をノックダウンするように設計されており、直交検証戦略のための強力なツールであり、特異性の高いリードアウトが得られます。
CRISPRゲノム編集と siRNAを用いた遺伝子ノックダウンでは、必要な試薬を細胞に効率良く導入することが必要です。これは、導入条件の最適化実験により実現できます。このブログでは、リバーストランスフェクション条件の最適化のテクニックと、30 のトランスフェクション条件をテストするための 96 ウェル プレートのセットアップ方法について説明します。
Accell siRNAは、トランスフェクションが困難な初代免疫細胞の遺伝子ノックアウトに使用されており、多くの参考文献があります。詳細については、こちらをご覧ください。
DharmaconのON-TARGETplus siRNAがどのようにターゲット特異性を確保し、オフターゲット効果を回避してRNAi研究に信頼をもたらすかを説明しています。
トランスフェクションが難しい細胞株でRNAi実験を最適化したいですか？ Accell siRNAを用いた最適なデリバリーと機能的ノックダウンのためのワークフローの推奨事項をお読みください。
大規模なgain-of-functionスクリーニングは、主に従来の試薬（ORF）を使用する際の調達上の複雑さのために、loss-of-function研究と同じほどは使用されていません。ここでは、ハイスループットORFスクリーニングを設定する際のハードルと、CRISPRaが、スクリーニング手段を拡張し、発見の可能性を最大化できる新しい解決策をどのように提供するかについて説明します。