Cas9ヌクレアーゼ発現試薬
プロモーターおよび濃縮方法を選択できる非レンチウイルスCas9発現プラスミド

CRISPR-Cas9システムにおけるCas9ヌクレアーゼ
CRISPR関連酵素Cas9は、ゲノムDNAの標的認識とDNA二重鎖切断(DSB)のためにガイドRNAを必要とするRNA-guidedエンドヌクレアーゼです。
Cas9ヌクレアーゼ発現プラスミドは、RNA pol IIプロモーターの制御下にあるS. pyogenes Cas9遺伝子のヒトコドン最適化バージョンをコードします。Cas9ヌクレアーゼ発現プラスミドは、Edit-R 化学合成ガイドRNAと直接共トランスフェクションするためのエンドトキシンフリーの精製済みDNAとして提供される非レンチウイルスベクターです。
Cas9ヌクレアーゼ発現プラスミドのハイライト
- 使用する濃縮方法と細胞タイプに基づいて、3つのプラスミドオプションから選択できます。
- mKate2蛍光レポーター
- ピューロマイシン耐性マーカー
- hCMVプロモーターおよびブラストサイジン耐性マーカー
- 6つのSMARTchoiceプロモーターオプションから選択できます。
すべてのRNA pol IIプロモーターは異なる細胞環境で同等にアクティブではない
Cas9ヌクレアーゼの転写を制御する任意のプロモーターの活性は、生物学的状況によって大きく異なる可能性があり、Cas9の発現レベルが変化し、ひいてはDNA切断のレベルが変化します。したがって、細胞株または細胞タイプに最適なプロモーターを選択することは、実験におけるゲノム編集の程度に影響します。Cas9ヌクレアーゼ発現プラスミドには、6つの異なるよく特徴付けられた細胞プロモーターが用意されており、その中から選択できます。
Cas9ヌクレアーゼを発現するための6つのSMARTchoiceプロモーターオプション
Promoter | Description |
---|---|
hCMV | human cytomegalovirus immediate early promoter |
mCMV | mouse cytomegalovirus immediate early promoter |
hEF1α | human elongation factor 1 alpha promoter |
mEF1α | mouse elongation factor 1 alpha promoter |
PGK | mouse phosphoglycerate kinase promoter |
CAG | chicken beta actin hybrid promoter |
Cas9ヌクレアーゼ発現プラスミドとEdit-R 化学合成ガイドRNAを使用した遺伝子ノックアウトワークフロー

ゲノム編集に必要なEdit-R CRISPR-Cas9コンポーネント(Cas9ヌクレアーゼを発現するプラスミド、tracrRNA、目的の標的部に対して設計されたcrRNA)の図:
遺伝子破壊を行うために、DharmaFECT Duoトランスフェクション試薬を使用して、選択した哺乳類細胞に3つのコンポーネントのすべてをコトランスフェクトします。トランスフェクトされた細胞の濃縮は、蛍光細胞選別またはピューロマイシン耐性の選択によって行うことができます。
Less time preparing, more time experimenting
Edit-R Gene Engineeringシステムは、高品質の化学合成tracrRNAとcrRNAを用いてCas9ヌクレアーゼをプログラムするため、個々のsgRNAをクローン化する必要がなく、時間と労力を節約できます。
Cas9ヌクレアーゼ発現プラスミドを用いた実験データ
SMARTCas9-mKate2発現プラスミドを使用したCas9発現U2OS細胞のFACSによる濃縮は、標的ゲノム編集の増加をもたらす
FACSによるSMARTCas9-mKate2発現プラスミドを使用したCas9発現U2OS細胞の濃縮により、ヒトPPIBの編集%が増加します。U2OS細胞に、SMARTCas9-mKate2(ヒトCMVプロモーターを含む)発現プラスミド、およびヒトPPIB遺伝子を標的とするtracrRNA:crRNAをトランスフェクトしました。72時間後にMoFlo XDP 100機器でmKate2蛍光のnegative、low、high対応する細胞をソーティングし、3つのチューブに分けました。SURVEYOR™ DNAミスマッチアッセイは、選別されたU2OS細胞で実行し、%ゲノム編集が、US(= unsorted)および対照であるUT(= untransfected)と比較しました。編集のレベルは、デンシトメトリー(%編集)を使用して計算しました。ソーティング細胞では、mKate2発現の増加と相関して、%ゲノム編集の増加が観察されます。
Cas9-mKate2発現プラスミドのベクターエレメントとプロモーターオプション

Cas9-mKate2 プラスミドは、単量体赤色蛍光タンパク質mKate2、および6種類のRNA pol II プロモーターのいずれかによって駆動されるS. pyogenes由来のヒトコドン最適化Cas9ヌクレアーゼを発現します。自己切断ペプチドT2Aを使用してmKate2の発現をCas9ヌクレアーゼにリンクすることにより、FACSによるmKate2陽性細胞のソーティングによりCas9発現細胞が濃縮され、ゲノム編集イベントを受けた細胞のパーセンテージが増加します。
Cas9-PuroR発現プラスミドのベクターエレメントとプロモーターオプション

Cas9-PuroRプラスミドは、ピューロマイシン耐性選択マーカー、および6種類のRNA pol II プロモーターのいずれかによって駆動されるS. pyogenes由来のヒトコドン最適化Cas9ヌクレアーゼを発現します。自己切断ペプチドT2Aを使用してピューロマイシン耐性マーカーの発現をCas9ヌクレアーゼにリンクすることにより、ピューロマイシンで処理して細胞を選択すると、Cas9発現細胞が濃縮され、ゲノム編集イベントを受けた細胞のパーセンテージが増加します。
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Application notes
Certificate of analysis
Protocols
Safety data sheets
Selection guides
Related Products
Optimized for co-transfection, DharmaFECT Duo transfection reagent provides highly effective delivery of siRNA, microRNA or crRNA reagents with plasmid
Catalog ID:T-2010-01
Unit Size:0.2 mL
$114.00
化学合成されたtrans-activating CRISPR RNA(tracrRNA)は、化学合成crRNAとともに用います。迅速かつ簡便なゲノム編集を実現します。
ポジティブコントロールcrRNAを用いて、最適なゲノム編集条件を検討します。ミスマッチ検出アッセイプライマーとのキット製品もご用意しています。